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PCR产物直接酶切然后纯化
用于与载体连接的
pcr酶切产物
是如何
纯化
的 、、
答:
跑胶后找到目的片段,切胶回收,纯化的传统法就是将PCR产物加入2倍体积的乙醇-20度沉淀过夜后低速短暂离心(如 3000rpm离心1~2min),弃掉上清,
然后
用70%乙醇洗涤一次后,弃掉乙醇,放干后再用无菌水或者TE溶解.当然这种方法对
PCR产物纯化
后回收率是很低的,你需要多做几管PCR,然后一起纯化回收.但是现在...
PCR产物酶切
后需要
纯化
,我们是用的试剂盒,但是试剂盒纯化的原理是什么呢...
答:
PCR产物酶切
后跑胶,不是有你需要的条带么,你看大小切出你需要的条带,试剂盒只是把你切出的胶质里的DNA回收回来 柱子黏附的是DNA 不懂可以追问
在测序前如何进行
pcr产物
的
酶切纯化
,注意我想知道的是用于测序的pcr产 ...
答:
这种方法是采用虾碱
酶
(SAP,Shrimp Alkaline Phosphatase)和外切酶I的混合溶液,来消化pcr扩增体系中多余的dNTPs和引物,以便后面的测序。一般使用的终浓度为1ul混合溶液中,含有虾碱酶0.6单位,外切酶I1.2个单位,这个比例也可以自己通过试验来调整。一般是1ul
pcr产物
加2ul溶液。37度孵育15分钟,即可...
做完
PCR
和
酶切
后为什么要做
纯化
?
答:
因为你做
pcr
和酶切都会引入很多试剂啊离子啊什么的可能影响后一步实验 而且你做
酶切后
不
纯化
的话 切下来的片段还在那里可能发生自连
如何对
PCR
扩增的
产物
进行
酶切
?
答:
个人认为需要对
PCR产物
进行
酶切
分析通常是为了或基因表 型分析,由于Taq,Pfu等高温聚合酶在酶切温度(37度或更高)下,仍然保持一定的活性,高温聚合酶所具有的聚合或无模板添A或外切修正的功能仍在一 定的程度上表现出来,可能会影响到酶切产物末端的正确性。结果是要么装不上去,要么装上去切不下来...
如何对
PCR
扩增的
产物
进行
酶切
?
答:
1. 首先确认
PCR产物
,取一小部分PCR产物跑胶。2. 如果产物良好,一个特异性很强的条带,则用过柱的方法提纯(就是你平时用的从溶液中
纯化
DNA的试剂盒就可以)。楼上说的跑胶后再提,早就过时了。效率很低。3,提纯加入限制性内切酶缓冲液,酶。按照平时的方法反应就可以了。4.
酶切
后再过柱...
双
酶切
时,
PCR
样为何需
纯化
?
答:
首先,你用的是质粒模板;其次,你扩增得到的非单一条带,如果不
纯化直接酶切
,那么得到的将是带有相应酶切位点的几种片段,继续试验的话,菌落
PCR
鉴定时可能会出现几种不同大小的条带,运气好的话也会有阳性克隆。你也可以做个试验尝试下。
双
酶切
时,是
直接
用
pcr产物
就可以,还是需要
答:
双
酶切
时间及其体系:需要强调的是很多人建议酶切过夜,其实完全没有必要,我一般酶切3个小时,其实1个小时已经足够。应用大体系,如100微升。纯化问题:
纯化PCR产物
割胶还是柱式,我推荐柱式,因为割胶手法不准,很容易割下大块的胶,影响纯化效率。现在的柱式纯化号称可以祛除引物,既然如此,酶切掉的几...
PCR
扩增出目的片段之后为什么要
酶切
?酶切下来的是目的片段和载体?然 ...
答:
应为
PCR
扩增出来的是混合物,
酶切
回收后才基本是纯的目的片段。载体一般不用PCR扩增,一般是质粒来源,也需要用切口一致的酶消化回收。之后连起来就好了
转化大肠杆菌之前用了
PCR纯化
,会不会有影响
答:
如果你指的是
PCR产物
,在
酶切
和连接之前做了纯化,这往往是必要的(如果条带单一,纯度好,酶切和连接体系成熟,也可以不纯化);如果是在连接试验后,再用试剂盒纯化一次,这会对实验有很大的影响:1、纯化过程本身会有较大损失,起始量约少,相对损失就越大;2.
pcr的纯化
试剂盒往往是针对小片段...
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