如何对PCR扩增的产物进行酶切？

Question

如何对PCR扩增的产物进行酶切？

Answer 1

1. 首先确认PCR产物，取一小部分PCR产物跑胶。
2. 如果产物良好，一个特异性很强的条带，则用过柱的方法提纯（就是你平时用的从溶液中纯化DNA的试剂盒就可以）。楼上说的跑胶后再提，早就过时了。效率很低。
3，提纯加入限制性内切酶缓冲液，酶。按照平时的方法反应就可以了。
4. 酶切后再过柱提纯就可以了。

Answer 2

博凌科为-为你解答：某公司的研究表明，限制性内切酶在 PCR扩增体系中仍然有部分活性，可以通过稀释（3倍以上）扩增混合液，适当提高酶量和反映时间，进行酶切。我个人认为需要对PCR产物进行酶切分析通常 是为了克隆或基因表型分析，由于Taq，Pfu等高温聚合酶在酶切温度（37度或更高）下，仍然保持一定的活性，高温聚合酶所具有的聚合或无模板添A或外切修正的功能仍在一定的程度上表现出来，可能会影响到酶切产物末端的正确 性。结果是要么装不上去，要么装上去切不下来，测序发现末端引物碱基少了。正确安全的做法是先通过琼脂糖电泳回收产物，然后酶切，酶切可以适当提高酶的用量。一般的做法是从50ulPCR反应中回收的产物，溶 解于45ul水中，加入酶，酶切后的产物通过从溶液中回收DNA的方式直接回收，不需要跑琼脂糖电泳。