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纯化后酶切还是酶切后纯化
做基因多态性,PCR产物必须
纯化后
才能
酶切
吗
答:
博凌科为-为你解答:如果你不
纯化
,直接做
酶切
不是不行,而是PCR产物里面缓冲液并不是合适的酶切缓冲液,会极大的影响酶切的效率。甚至于根本就切不开,即便你隔夜酶切。 你可以自己检查一下那些用来做酶切的缓冲液(A,B,C,D,E,H,Multi-Core)之间成分的差别,和酶在各个不同缓冲液的效...
求教对于单抗糖型分析的具体
纯化
和分析方法
答:
酶切可以按买到的试剂说明书进行操作 酶切后的纯化
,有两种方法:一种是萃取柱;还有一种是加热使蛋白析出,再离心去除蛋白。也可以采取有机溶剂沉淀蛋白的方法来除去蛋白 收集寡糖,可以用HILIC SPE萃取收集 2-AB荧光标记可以按买到的试剂说明书进行操作 除去多余标记可以用超滤管去除 ...
转化大肠杆菌之前用了PCR
纯化
,会不会有影响
答:
如果你指的是PCR产物,在
酶切
和连接之前做了
纯化
,这往往是必要的(如果条带单一,纯度好,酶切和连接体系成熟,也可以不纯化);如果是在连接试验后,再用试剂盒纯化一次,这会对实验有很大的影响:1、纯化过程本身会有较大损失,起始量约少,相对损失就越大;2. pcr的纯化试剂盒往往是针对小片段...
我需要用三种平末端的限制性内切
酶切
割植物基因组DNA然后与接头连接,有...
答:
一般酶切后都要纯化
,这样连接效率才高,很多试剂公司都专门的纯化试剂盒,回收效率高。我做过某个基因的双酶切,然后连接到载体的克隆实验。你切这个基因组这个我就不太了解
表达载体载体上单
酶切
可以成功吗
答:
可能
酶切
体系和ECOR1的缓冲体系不一样,试着分别酶切,就是先切cla1,然后
纯化后
切ECOR1;或者查找哪个酶的酶切效率高些,那个后切;2、3个小时可能太短了,我一般都是5个小时,或者过夜;3、可能是你菌挑错了,或污染了,重新调菌或者把原来构建成功的质粒进行转化,再酶切。希望对你有帮助。
做完PCR和
酶切后
为什么要做
纯化
?
答:
因为你做pcr和酶切都会引入很多试剂啊离子啊什么的可能影响后一步实验 而且你做
酶切后
不
纯化
的话 切下来的片段还在那里可能发生自连
...是就还可以加sumo蛋白
酶酶切
,
还是
必须洗下来
以后
才能酶切?_百度知 ...
答:
不是绝对的,两种方法其实都差不多。但是柱切和洗脱
后酶切还是
有不同的。柱切比较方便,
酶切之后
直接收流穿的部分就是目的蛋白。缺点是在洗脱之前不知道蛋白产量,可能努力了半天什么都没有,而且有些蛋白不稳定,可能在柱切过程中沉淀在柱子上了。洗脱后再切,比较直观的检测初步富集的蛋白量,再决定...
若DNA需要使用两种酶进行
酶切
,应如何进行?
答:
那就可以同时双
酶切
。如果找不到就只能采用分步酶切。分步酶切应从反应要求盐浓度低的酶开始,酶切完毕后再调整盐浓度直至满足第二种酶的要求,然后加入第二种酶完成双酶切反应。NEBuffer的组成及内
切酶
在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液里的活性表》及每支酶的说明书。
pcr产物没有
纯化
能够直接进行双
酶切
吗
答:
不可以。首先,采用的是质粒模板;其次,扩增得到的非单一条带,如果不
纯化
直接
酶切
,那么得到的将是带有相应酶切位点的几种片段,继续试验的话,菌落PCR鉴定时可能会出现几种不同大小的条带。第三、PCR产物里面缓冲液并不是合适的酶切缓冲液,会极大的影响酶切的效率。甚至于根本就切不开,即便是...
分步双
酶切
答:
不用试剂盒,也不用再次
纯化
pcr产物,会损失。我可以告诉你步骤:如果两种
酶
的buffer浓度相同可以同时加进去切,如果不相同,先用低浓度切,再用高浓度切。我只说后一种:30/50ul体系中2ul第一种酶,3ul buffer,按照你pcr产物的亮度来配比,不足部分用水补充,反正达到30ul就可以了,切两个小时后...
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