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酶切产物纯化浓度低
DNA的纯度会不会影响
酶切
产生的质量?为什么
答:
DNA的纯度低,要看导致低的原因是什么?
一般来说可能的原因包括抽提时的乙醇或异丙醇残留、蛋白残留多、试剂中的杂质等
。一般来说会对后续的酶切有影响,尤其是乙醇残留或存在酶抑制剂等。你可以尝试一下先酶切看看,如果发现对酶切确有影响。最简单的方法就是
使用液体回收试剂盒对DNA进行纯化一下即可
。 本回答由提...
用于与载体连接的pcr
酶切产物
是如何
纯化
的 、、
答:
跑胶后找到目的片段,切胶回收,纯化的传统法就是将PCR产物加入2倍体积的乙醇-20度沉淀过夜后低速短暂离心(如 3000rpm离心1~2min),弃掉上清,然后用70%乙醇洗涤一次后,弃掉乙醇,放干后再用无菌水或者TE溶解.当然这种方法对PCR
产物纯化
后回收率是很低的,你需要多做几管PCR,然后一起纯化回收.但是现在...
切胶回收
浓度
小于10能用吗
答:
能用。试剂盒一般收率会在一半左右,如果同体积的话,最终切胶回收
浓度
大概25纳克每微升,就算
低于
10也能连,是足够用的。切胶,是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收,切胶回收是
纯化
方式的一种,比如做过单
酶切
之后,想要得到纯化的目的条带,就可以用刀把电泳后的亮带切下来,然后用胶回收试剂盒...
酶切
技术技术问题
答:
66μg。连接反应中,TAKARA的连接
酶
以350U/μl的
浓度
提供,足以在20μl反应体系中完成大部分连接。连接酶需低温操作,连接反应一般3小时即可完成。最后,进行转化时,将PCR
产物
与感受态细胞混合,42℃短暂热处理后,加入AMP阴性培养基在37℃下振荡培养,然后取一定量进行涂布或离心后保存。
酶切
技术的技术问题
答:
而该
酶浓度
约为15单位/微升,在除外酶降解的因素外,该酶可分解15μg的DNA,而一般从1-4ml菌液提出的DNA约为3μg,而PCR
纯化
后的
产物
(50体系)约为3μg,所以即便全部加进去,只要纯化的质量好,
酶切
完全切得动。2、酶切、回收后的PCR产物与载体的连接摩尔比的计算,回收的载体片段:回收的PCR...
...全血PCR
产物
测得DNA
浓度
5000多纳克 过柱子
纯化
后20微升体系测得浓度...
答:
其次,你的目的片段大小。是否使用了正确的试剂盒:这个DNA
纯化
试剂盒是对基因组dna还是pcr或
酶切产物
的?一般几百到几kb的片段用试剂盒回收都不会有问题,但小片段(如100bp或更小)用普通试剂盒回收,其回收率是比较低的,需用小片段试剂盒。如果上述两方面都没问题,再检查回收过程,对pcr产物最好...
质粒提取与
纯化
的区别做
酶切
的质粒需要做纯化吗
答:
每次取出一部分来,不反复冻融,保存会比较好 3.
酶切
质粒的
浓度
,通常浓度越高,质粒也会越稳定.以前我们实验室做的pET载体,保存在-20C半年多都能用,就是做得很浓 4.为了保险起见,可以在连接前取一小部分载体去电泳看一下,有没有降解,如果条带清晰,亮度也理想的话,没有问题,可以使用的.
酶切
反应注意事项
答:
目前大多数研究者遵循一条规则,即10个单位的内切酶可以切割1μg不同来源和纯度的DNA。通常,一个50μl的反应体系中,1μl的
酶
在1X NEBuffer终
浓度
及相应温度条件下反应1小时即可降解1μg已
纯化
好的DNA。如果加入更多的酶,则可相应缩短反应时间;如果减少酶的用量,对许多酶来说,相应延长反应时间...
在测序前如何进行pcr
产物
的
酶切纯化
,注意我想知道的是用于测序的pcr产 ...
答:
一般是1ulpcr
产物
加2ul溶液。37度孵育15分钟,即可除去多余的引物以及dNTPs,然后80度,15分钟就可以使虾碱
酶
失活。这个方法的优点是简单、快速、省钱、不损失样品,缺点是对样品要求高,如果一次
纯化
测序结果不好还要重来,费时费力。所以现在测序公司一般都是使用胶回收试剂盒来纯化,这样虽然工作量比较...
1、为什么质粒
酶切产物
需要电泳后再胶回收,而不是直接进行酶连
答:
胶回收则能够进一步
纯化
所需的DNA片段,去除存在的杂质和小片段。2、去除残留的酶:在
酶切
反应中,酶会与DNA片段结合或残留。通过电泳和胶回收,可以去除这些残留的酶,防止它们干扰后续的酶连反应。3、提高酶连效率:经过电泳和胶回收纯化的DNA片段具有更高的纯度和
浓度
,这样可以提高酶连反应的效率,使...
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