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酶切产物纯化
用于与载体连接的pcr
酶切产物
是如何
纯化
的 、、
答:
跑胶后找到目的片段,切胶回收,纯化的传统法就是将PCR产物加入2倍体积的乙醇-20度沉淀过夜后低速短暂离心(如 3000rpm离心1~2min),弃掉上清,然后用70%乙醇洗涤一次后,弃掉乙醇,放干后再用无菌水或者TE溶解.当然这种方法对PCR
产物纯化
后回收率是很低的,你需要多做几管PCR,然后一起纯化回收.但是现在...
在测序前如何进行pcr
产物
的
酶切纯化
,注意我想知道的是用于测序的pcr产 ...
答:
这种方法是采用虾碱
酶
(SAP,Shrimp Alkaline Phosphatase)和外切酶I的混合溶液,来消化pcr扩增体系中多余的dNTPs和引物,以便后面的测序。一般使用的终浓度为1ul混合溶液中,含有虾碱酶0.6单位,外切酶I1.2个单位,这个比例也可以自己通过试验来调整。一般是1ulpcr
产物
加2ul溶液。37度孵育15分钟,即可...
质粒
酶切
的
纯化
方式会影响连接吗
答:
需要,被切掉的部分同样带有粘性末端(因为粘性末端的碱基互补),会干扰目的片段与载体连接。如果不想用胶回收方法
纯化
,可以选择吸附柱过滤除掉被切掉的小分子片段。胶回收纯化的好处是直观的判断
酶切
实验结果是否理想,是否酶切完全,胶回收可以避免收集不完全酶切的质粒片段(包括完整的环状质粒和线性质粒...
1、为什么质粒
酶切产物
需要电泳后再胶回收,而不是直接进行酶连
答:
1、分离和
纯化
:电泳能够有效地将
酶切产物
分离,通过凝胶电泳可以将不同大小的DNA片段分开。胶回收则能够进一步纯化所需的DNA片段,去除存在的杂质和小片段。2、去除残留的酶:在酶切反应中,酶会与DNA片段结合或残留。通过电泳和胶回收,可以去除这些残留的酶,防止它们干扰后续的酶连反应。3、提高酶连...
做完PCR和
酶切
后为什么要做
纯化
?
答:
因为你做pcr和
酶切
都会引入很多试剂啊离子啊什么的可能影响后一步实验 而且你做酶切后不
纯化
的话 切下来的片段还在那里可能发生自连
DNA
酶切产物
再
纯化
后电泳,怎么看起来变长了
答:
DNA
酶切产物
再
纯化
后电泳,怎么看起来变长了 你做胶回收的那个柱子,只吸附DNA,就算有蛋白和其他杂质也在胶回收步骤中洗掉了,转化效率低一般不会是这个原因.你先看看这些步骤有没有需要优化:1.连接体系:粘末端是否匹配,载体与片段的比例、多少,Buffer,酶量,等等,可以参照连接酶的说明书.2.转化体系:...
DNA
酶切产物
再
纯化
后电泳,怎么看起来变
答:
DNA
酶切产物
再
纯化
后电泳,怎么看起来变长了 你做胶回收的那个柱子,只吸附DNA,就算有蛋白和其他杂质也在胶回收步骤中洗掉了,转化效率低一般不会是这个原因.你先看看这些步骤有没有需要优化:1.连接体系:粘末端是否匹配,载体与片段的比例、多少,Buffer,酶量,等等,可以参照连接酶的说明书.2.转化体系:...
酶切
技术技术问题
答:
首先,回收PCR
产物
时,选择合适的限制酶至关重要。推荐使用BamHI和HindIII等高效粘端酶,同时注意查看各公司使用的公用BUFFER和酶在其中的效率。在引物两端设计
酶切
位点,并添加保护碱基以防止酶切损伤。在酶切过程中,一般3小时的酶切时间足够,无需过夜。使用大体系,如100微升,可以提高效率。对于
纯化
...
DNA
酶切产物
再
纯化
后电泳,怎么看起来变长了?
答:
这得用物理化学知识来解释,纯的DNA
酶切产物
是带有电荷的,电泳的时候会向一个方向游动,受到水的阻力自然会变长,而不纯的时候会受到杂质的干扰不会变长,具体原因很复杂,建议你看一下物理化学有关胶体方面的书.
PCR
产物酶切
后需要
纯化
,我们是用的试剂盒,但是试剂盒纯化的原理是什么呢...
答:
PCR
产物酶切
后跑胶,不是有你需要的条带么,你看大小切出你需要的条带,试剂盒只是把你切出的胶质里的DNA回收回来 柱子黏附的是DNA 不懂可以追问
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