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PCR产物直接酶切然后纯化
用于与载体连接的
pcr酶切产物
是如何
纯化
的
答:
跑胶后找到目的片段,切胶回收,纯化的传统法就是将PCR产物加入2倍体积的乙醇-20度沉淀过夜后低速短暂离心(如 3000rpm离心1~2min),弃掉上清,
然后
用70%乙醇洗涤一次后,弃掉乙醇,放干后再用无菌水或者TE溶解。当然这种方法对
PCR产物纯化
后回收率是很低的,你需要多做几管PCR,然后一起纯化回收。
双
酶切
时,
PCR
样为何需
纯化
?
答:
首先,你用的是质粒模板;其次,你扩增得到的非单一条带,如果不
纯化直接酶切
,那么得到的将是带有相应酶切位点的几种片段,继续试验的话,菌落
PCR
鉴定时可能会出现几种不同大小的条带,运气好的话也会有阳性克隆。你也可以做个试验尝试下。
做基因多态性,
PCR产物
必须
纯化
后才能
酶切
吗
答:
如果你不
纯化
,
直接
做
酶切
不是不行,而是
PCR产物
里面缓冲液并不是合适的酶切缓冲液,会极大的影响酶切的效率。甚至于根本就切不开,即便你隔夜酶切。 你可以自己检查一下那些用来做酶切的缓冲液(A,B,C,D,E,H,Multi-Core)之间成分的差别,和酶在各个不同缓冲液的效率...
对
PCR产物酶切
内切酶的选择
答:
对
PCR产物酶切
内切酶的选择 1. 首先确认PCR产物,取一小部分PCR产物跑胶。2. 如果产物良好,一个特异性很强的条带,则用过柱的方法提纯(就是你平时用的从溶液中
纯化
DNA的试剂盒就可以)。楼上说的跑胶后再提,早就过时了。效率很低。3,提纯加入限制性内切酶缓冲液,酶。按照平时的方法反应就...
求分子克隆具体实验步骤一份~~多谢各位大侠啦~
答:
(琼脂糖凝胶的配制:1xTAE缓冲液+琼脂糖 加热至琼脂糖全部溶解
然后
冷却至60℃以下加入EB混匀倒板。其中琼脂糖含量为1g/100ml,EB含量为0.1ul/ml) 4.
酶切产物纯化
:根据
PCR产物
回收试剂盒上流程回收酶切产物,最后用20-30ul ddH2O洗脱-20℃保存或下一步实验. 第二天 三.外源DNA片段在质粒载体中的克隆 1.外源...
PCR的
原理
答:
浓度过低又会降低
PCR产物
的产量。dNTP能与Mg2+结合,使游离的Mg2+浓度降低。 模板(靶基因)核酸 模板核酸的量与
纯化
程度,是PCR成败与否的关键环节之一,传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白
酶
K来消化处理标本。 SDS的主要功能是: 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜,并解离细胞中的核蛋白,SDS ...
pcr产物
没有
纯化
能够
直接
进行双
酶切
吗?
答:
不可以。\x0d\x0a首先,采用的是质粒模板;\x0d\x0a其次,扩增得到的非单一条带,如果不
纯化直接酶切
,那么得到的将是带有相应酶切位点的几种片段,继续试验的话,菌落PCR鉴定时可能会出现几种不同大小的条带。\x0d\x0a\x0d\x0a第三、
PCR产物
里面缓冲液并不是合适的酶切缓冲液,会极大...
pcr产物
没有
纯化
能够
直接
进行双
酶切
吗?
答:
不可以。首先,采用的是质粒模板;其次,扩增得到的非单一条带,如果不
纯化直接酶切
,那么得到的将是带有相应酶切位点的几种片段,继续试验的话,菌落PCR鉴定时可能会出现几种不同大小的条带。第三、
PCR产物
里面缓冲液并不是合适的酶切缓冲液,会极大的影响酶切的效率。甚至于根本就切不开,即便是...
简述
PCR
技术的基本原理及反应条件的选择
答:
在PCR反应中,应为~,尤其是注意种的浓度要相等等摩尔配制,如其中任何一种浓度不同于其它几种时偏高或偏低,就会引起错配。浓度过低又会降低
PCR产物
的产量。能与2+结合,使游离的2+浓度降低。模板核酸的量与
纯化
程度,是PCR成败与否的关键环节之一,传统的DNA纯化方法通常采用和蛋白
酶
来消化处理标本。的主要功能是: ...
DNA
酶切
之后,
产物直接
电泳,胶回收之后的产物中酶还有活性吗
答:
1. 首先确认
PCR产物
,取一小部分PCR产物跑胶. 2. 如果产物良好,一个特异性很强的条带,则用过柱的方法提纯(就是你平时用的从溶液中
纯化
DNA的试剂盒就可以).楼上说的跑胶后再提,早就过时了.效率很低. 3,提纯加入限制性内切酶缓冲液,酶.按照平时的方法反应就可以了. 4.
酶切
后再过柱提纯就...
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