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PCR产物直接酶切然后纯化
请问PCR产物
双
酶切
后跑电泳结果是怎样的,对PCR产物做这个有意义吗_百度...
答:
一般根据经验切完之后,挖胶回收,如果产物带很特异的话,
直接PCR产物
回收也可以(方便),都可以达到
纯化
的目的,这也就是你说的意义了。碰到
酶切
效率不高的情况,我们会先把目的片段克隆到T载体上,
然后
再切T载体,跑胶回收。这样就可以清晰的看到被切下来的目的片段,麻烦一些,但是很确定。
pcr产物
不
纯化直接酶切
连接可以吗?PCR反应的buffer会不会对酶产生影响...
答:
理论可以,但是会影响效率。你到底是先
酶切
还是
直接
用T载体连接呢?
PCR产物
做完酶切后再以
酶切产物PCR
用来鉴定基因的具体内容是怎样的啊...
答:
酶切
完再
PCR
是为了与目的基因进行对比看PCR过程中序列是否发生了改变,如:缺失,错配等
PCR产物
的
酶切
问题
答:
结果不确定,第一种可能性是:你
PCR
反应的温度(退火温度)和时间(延伸时间)没有掌握好。因为PCR反应的特异性决定于退火温度的高低,退火温度越低,应物越容易发生错配,这样的话也会有杂带。第二种可能是
酶切
不完全,也就是你酶切时间不够,不过你说酶切过夜了,这种可能性不会很大。还有一种...
请问C端带标签的重组蛋白用哪个载体构建?
答:
首先把表达标签载体选择好了,是HA还是FLAG、HIS还是EGFP等等, 然后确定目的克隆蛋白编码DNA的来源,可以购买,也可以自己从基因组DNA中PCR 之后就是要把两者接在一起,首先要根据表达载体选择酶切位点,之后把
PCR产物酶切
,
然后纯化酶切
产物,再用连接酶把载体和目前DNA连接起来,再纯化就可以了。
关于PCR产物酶切
答:
2、分步
酶切
如果找不到一种可以同时适合两种酶的缓冲液,就只能采用分步酶切。分步酶切应从反应要求盐浓度低的酶开始,酶切完毕后再调整盐浓度直至满足第二种酶的要求,
然后
加入第二种酶完成双酶切反应。具体的你看 百度百科 http://baike.baidu.com/view/1380500.htm 反应体系的话酶供应上岁产品...
胶回收后连接不上
答:
博凌科为-为你解答:建议的步骤:1.
PCR产物纯化
(用kit)2.
PCR产物酶切
3.酶切产物跑电泳的时候,用低温溶解的Agarose和TAE缓冲液。4.从胶里切回酶切的PCR片段,
直接
加适量的水(比如30微升)在55度下溶解大概5分钟就够了。5.直接用这个来连接。Good luck ...
介绍一下
PCR
答:
浓度过低又会降低
PCR产物
的产量。dNTP能与Mg2+结合,使游离的Mg2+浓度降低。 模板(靶基因)核酸 模板核酸的量与
纯化
程度,是PCR成败与否的关键环节之一,传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白
酶
K来消化处理标本。 SDS的主要功能是: 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜,并解离细胞中的核蛋白,SDS ...
为什么我们基因克隆老失败
答:
1 建议你
直接切PCR产物
,在
酶切
位点两端加2~3个保护碱基再切。这样避免两次
纯化
的麻烦。我都是这么做的。2 你的T载体连接成功了么?就是有没有拿到重组T载体?3 你用的是Taq还是高保真聚合酶?如果是Taq的话当心是在引物区或酶切位点造成点突变使得切不动。
PCR纯化产物
为什么能
直接
连接,什么情况下直接连接?求高手指教。_百度知 ...
答:
PCR纯化产物直接
连接通常分为两种情况,一是TA连接,如phusion,高保真的taq,PCR后会有一个A末端,和T载体的T末端互补相连。另一是平末端连接,如pfu,PCR后是平末端,可以和blunt II vector这一类的载体直接相连,但顺序是随机的,可能是正的,也可能是反的。
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