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做完PCR和酶切后为什么要做纯化?
如题所述
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推荐答案 2011-07-22
因为你做pcr和酶切都会引入很多试剂啊离子啊什么的可能影响后一步实验 而且你做酶切后不纯化的话 切下来的片段还在那里可能发生自连
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其他回答
第1个回答 2011-07-22
有很多缓冲液及非目的小片段,会干扰后续试验
第2个回答 2011-07-22
看后续试验,也不一定都需要纯化~
相似回答
双
酶切
时,
PCR
样
为何
需
纯化?
答:
首先,你用的是质粒模板;其次,你扩增得到的非单一条带,如果不
纯化
直接
酶切
,那么得到的将是带有相应酶切位点的几种片段,继续试验的话,菌落
PCR
鉴定时可能会出现几种不同大小的条带,运气好的话也会有阳性克拢你也可以做个试验尝试下。
请问
PCR后
的
酶切
跑胶的原理和目的,谢谢。
答:
回收
纯化
得到目的条带,以用于下游的实验。
pcr纯化
试剂
答:
PCR产物纯化是去除多余的dNTP和引物二聚体。用纯化好的片段连接转化可以降低背景,提高转化效率
。通常转化后我们用几种方法来确认转化子,抽质粒酶切是比较可靠的。选择酶切大小与预计一致的克隆去测序。
DNA跑完胶
后为什么要
进行
纯化
答:
一般不能。
纯化除去的是taq酶、金属离子和ddNTP等,还有就是要除去非特异性扩增的条带
。有时候你虽然看不见那些条带,但是实际上是存在的。
PCR
产物
酶切后需要纯化
,我们是用的试剂盒,但是试剂盒纯化的原理是
什么
呢...
答:
PCR
产物
酶切后
跑胶,不是有你需要的条带么,你看大小切出你需要的条带,试剂盒只是把你切出的胶质里的DNA回收回来 柱子黏附的是DNA 不懂可以追问
用于
与
载体连接的
pcr酶切
产物是如何
纯化
的 、、
答:
跑胶后找到目的片段,切胶回收,
纯化
的传统法就是将
PCR
产物加入2倍体积的乙醇-20度沉淀过夜后低速短暂离心(如 3000rpm离心1~2min),弃掉上清,然后用70%乙醇洗涤一次后,弃掉乙醇,放干后再用无菌水或者TE溶解.当然这种方法对PCR产物纯化后回收率是很低的,你需要多做几管PCR,然后一起纯化回收.但是现在...
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