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PCR扩增出目的片段之后为什么要酶切?酶切下来的是目的片段和载体?然后再把它们连起来?很困惑。求指点。
如题所述
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推荐答案 2012-09-20
应为PCR扩增出来的是混合物,酶切回收后才基本是纯的目的片段。
载体一般不用PCR扩增,一般是质粒来源,也需要用切口一致的酶消化回收。
之后连起来就好了
追问
那PCR扩增出来的混合物里除了目的片段还有什么呢?
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为什么载体和
DNA
片段
都
要酶切?
答:
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,所以载体和DNA片段都要酶切产生粘性末端,然后才能连在一起。
...
载体
中用
PCR
获得
目的
基因,其中涉及的引物
为什么要
加
酶切
位点?难道...
答:
获得目的基因后一般需要将目的基因连接到质粒载体上,在引物上加酶切位点可以使后续的连接过程简单、可控
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PCR
反应
后为什么要酶切
,就是那个
酶切的目的是
什么
答:
在设计pcr引物时,会将酶切位点设计在引物里面,但是pcr后的片段是双链平末端,
需要将设计的酶切位点粘性末端暴露出来,所以需要酶切处理
。
酶切与PCR
之间有
什么
联系
答:
首先说区别,
酶切是把
连续的碱基序列(DNA或者RNA)切断,
PCR是把
单个的核苷酸单体连接成链状DNA。硬说他们有联系的话,只能这么理解,基因工程过程中,构建质粒载体的时候,我们先
PCR扩增目的
基因,然后经过
酶切之后
,得到合适的末端,这样就可以
把目的
基因跟
载体连接
起来了。
为什么要
对重组质粒DNA进行双
酶切
答:
双酶切就是为了验证是否有目的基因,如果双酶切条带正确,而且
PCR
也没有问题,就可以确定质粒构建成功。质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(<10kb)且结构简单,质粒要比其它任何
载体
都要好。在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的,先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段...
pcr
引物设计
为什么要
引入
酶切
位点
答:
这个不是必须的,要看你的实验要求。加酶切位点的目的是方便进行下面的克隆;如果你只是用于
PCR
鉴定等,添加酶切位点反而不好。
大家正在搜
为什么PCR出片段后还要酶切
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为什么酶切后片段变大了
载体酶切连接4kb的片段
酶切为什么会切出杂带
目的片段双酶切体系
酶切体系是什么
载体片段大酶切时间
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