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纯化后酶切还是酶切后纯化
关于 碱法提取质粒后琼脂糖凝胶电泳的问题
答:
不会是整齐唯一的)。但是目前 还未见鉴定究竟是哪个正确的报道。因此么 不要追究了,除非你自己下决心把那些条带分离出来搞清楚。设计实验如下:把你认为是线性的那个条带 切胶
纯化
;单
酶切
;电泳比较,如果酶切产物很整齐单一 可以推测 原来的条带一定不是线性片段。反之若弥散拖带 则可能是线性DNA。
DNA
酶切
产物再
纯化后
电泳,怎么看起来变长了
答:
DNA
酶切
产物再
纯化后
电泳,怎么看起来变长了 你做胶回收的那个柱子,只吸附DNA,就算有蛋白和其他杂质也在胶回收步骤中洗掉了,转化效率低一般不会是这个原因.你先看看这些步骤有没有需要优化:1.连接体系:粘末端是否匹配,载体与片段的比例、多少,Buffer,酶量,等等,可以参照连接酶的说明书.2.转化体系:...
单
酶切
问题
答:
建议:首先电泳时要有原质粒作对照,这样你就可以确定跑得快的带是不是未完全切开的质粒了。其次想
酶切
完全,可延长梅切时间,看你的体系酶的量足够了,而且酶的量本身也不应大于1/10;只是不知梅切的时间。最后若是可以确定两条带中有一条是切开的,则可以利用胶回收
纯化
的方法得到所需的这一载体...
单
酶切
需要回收吗
答:
需要。回收的目的主要是
纯化
和浓缩目的片段,并去掉
酶切
体系中的所有组分及非特异性片段。从连接效率上来看,不管哪种酶切方式,能回收的尽量做回收。
DNA重组子的鉴定中使用的AC与ED作用分别是什么?
答:
4. 将酶切处理的后pQE-31和pUC18-CAT 质粒,分别上样跑琼脂糖凝胶电泳(注意加DNA分子量标准)。电泳结束后用DNA琼脂糖胶
纯化
试剂盒按照试剂盒说明书的方法回收DNA片段。前者回收的片段为3.5kb,后者为650bp。5. 将回收的pQE-31载体质粒均分为两份,其中一份与
酶切后
回收的CAT片段混合,做连接;...
一道分子生物学题,急求解答,明天一早就要用了,答对了明天一定追加重分...
答:
什么二货老师出这样的题目呀,你就说没法做,这破玩意儿的缺陷如下:1.基因B的coding sequence就没有给全,当中有什么
酶切
位点未知。2.基因B所在的载体质粒也没有信息,也显得脑残。不能说为了考察学生的知识就瞎出题。按说只能把基因A用PCR扩增下来连入基因B的5‘端,可是基因B的5‘端就没有留下...
请问PCR后的
酶切
跑胶的原理和目的,谢谢。
答:
pcr
后酶切
是除去模板吧,用Dpn1酶切的吗,是这个就是除去甲基化的模板,然后肯定是要跑胶回收目的片段的啊
要配置多少的
酶切
体系,载体和插入DNA的量要加多少?
答:
因为内切酶的酶活性单位定义是在50ul反应体系中,最适温度反应1小时能够讲1ugDNA完全
酶切
的酶量.所以,一般在酶切体系里,DNA的量是可以加到非常大的.因为考虑到后期的
纯化后
DNA的损失问题,所以推荐酶切体系中的DNA尽量多加一些.这样你纯化回收后的DNA剩下的就比较多,有利于后期的连接以及筛选.具体的话...
酶切后
跑胶怎么会这样?
答:
而且那些浓度比较低的地方,会不会是因为杂合体的缘故,本来浓度就只有一半。能不能试着把胶的浓度降低,让带分的再开点。实验中的这种现象谁也不能很确定的说出什么原因,还是得试。如果你觉得需要
纯化
,那就纯化一次试试好了!如果觉得
酶切
不充分,就延长下反应时间!实验细节我也不清楚,建议也...
用XhoⅠ和NdeⅠ双
酶切
pET30a质粒总是只有一条带怎么回事??
答:
一条带就对了,要是没切开会有好几条带的,双
酶切后
的小片段太短了,只有大片段的百分之几,所以亮度也只有大片段的百分之几,仪器的灵敏度也是有限的,就像肉眼看不到细菌一样,看不到不表示不存在啊。
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