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我需要用三种平末端的限制性内切酶切割植物基因组DNA然后与接头连接,有谁做过这种试验吗?
求具体实验步骤,另外酶切后必须要纯化吗?如何纯化?
构建Genome Walker Librarie用的,有人知道吗?希望做过这方面试验的老师同学能帮帮我,真的很着急。。。
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推荐答案 2011-10-14
一般酶切后都要纯化,这样连接效率才高,很多试剂公司都专门的纯化试剂盒,回收效率高。
我做过某个基因的双酶切,然后连接到载体的克隆实验。你切这个基因组这个我就不太了解
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其他回答
第1个回答 2011-10-15
只有跑胶,切胶,做胶回收纯化
第2个回答 2011-10-13
切割基因组dna?那得切出多少段来?
相似回答
平末端
如何
连接
答:
1、
平末端
法,有些核酸内切酶切出
的DNA
分子是平末端,对DNA分子的单链末端亦可用核酸酶S1或DNA聚合酶Ⅰ来修平或补齐,然后用T4
DNA连接
酶将不同片段连接起来。该法形成重组DNA分子的效率低,只及粘性末端法的1%。2、人工接头法,1976年发展起来的。首先用化学法合成具有某种
限制性内切酶
识别位点的序列...
限制性
核酸
内切酶切割
的原理和方法
答:
DNA限制性内切酶
酶切图谱,又称DNA的物理图谱,它由一系列位置确定的多种限制性内切酶酶切位点组成,以直线或环状图式表示。在DNA序列分析、
基因组
的功能图谱绘制、DNA的无性繁殖、基因文库的构建等工作中,建立限制性内切酶图谱都是不可缺少的环节,近年来发展起来的RFLP(限制性片段长度多态性)技术更是...
DNA限制性内切酶酶切
的DNA限制性内切酶
酶切原理
答:
Ⅱ类中
的限制性内切酶
在分子克隆中得到了广泛应用,它们是重组DNA的基础。绝大多数Ⅱ类限制酶识别长度为4至6个核苷酸的回文对称特异核苷酸序列(如EcoRⅠ识别六个核苷酸序列:5'- G↓AATTC-3'),有少数酶识别更长的序列或简并序列。Ⅱ类
酶切割
位点在识别序列中,有的在对称轴处切割,产生
平末端的DN
...
限制性内切酶
可以
连接DNA
的
末端
吗?
答:
T4
DNA连接
酶也能催化限制性内切酶切割产生
DNA平末端的
连接。如果目的序列和载体上没有相同的限制性内切酶位点可供利用,用不同
的限制性内切酶切割
后的粘性末端不能互补结合。则可用适当的酶将DNA突出的末端削平或补齐成平末端,再用T4DNA连接酶
连接,
但平末端连接要比粘性
末端连接
的效率低得多。在分子生物...
DNA限制性内切酶
酶切DNA限制性内切酶酶切原理
答:
限制性内切酶
是一种特殊的酶,它具有独特的功能,能识别并
切割DNA
中的特定序列。这种酶主要分为三个类别:首先,I类和III类酶具有双重功能,它们既能结合
DNA的限制
酶识别序列,又能在ATP存在下进行
切割和
修饰。I类酶随机地在识别位点附近进行切割,而III类酶则在识别位点上直接进行
切割,切割
后会从DNA...
用
限制性内切酶切割
出的
平末端,
是否可以
用
连接酶随意
连接,
还用考虑是否...
答:
可以的,不用考虑回文结构,不过那种连接酶比较少
大家正在搜
限制性内切酶和限制性外切酶
用同一种限制性内切酶
限制性内切酶的应用
限制性内切酶的特点和应用
假如用限制性内切酶
限制性内切酶的特点
限制性内切酶发现过程
限制性内切酶专一性
限制性内切酶的表示方法