sumo融合蛋白的纯化时挂在Ni亲和柱上时是不是就还可以加sumo蛋白酶酶切，还是必须洗下来以后才能酶切？

Question

sumo融合蛋白的纯化时挂在Ni亲和柱上时是不是就还可以加sumo蛋白酶酶切，还是必须洗下来以后才能酶切？有没有人做过类似实验？

Answer 1

不是绝对的，两种方法其实都差不多。
但是柱切和洗脱后酶切还是有不同的。
柱切比较方便，酶切之后直接收流穿的部分就是目的蛋白。缺点是在洗脱之前不知道蛋白产量，可能努力了半天什么都没有，而且有些蛋白不稳定，可能在柱切过程中沉淀在柱子上了。

洗脱后再切，比较直观的检测初步富集的蛋白量，再决定加多少酶，而且能直观的检测酶切效率，确定是酶切之后要多一个去标签的过程。

Answer 2

建议洗脱下来之后再进行酶切吧，因为酶切反应有反应条件限制，需要特定的温度，反应体系，在亲和柱上不方便做。