第1个回答 推荐于2017-10-15
PCR产物经PCR纯化试剂盒纯化后,可以做EcoRI和BamHI的双酶切。酶切、纯化都可以用PCR纯化试剂盒完成,只有一种情况例外,PCR模板为质粒,且这个质粒和要用的载体有相同的抗性。此时需要跑一次胶来丢掉模板质粒,否则在连接产物转化的平板上长出的菌落许多是模板质粒,而不是你所构建的质粒。
PCR产物不经纯化也可以直接酶切,但也很麻烦,效果可能不会很好,可能需要添加其他东西(亚精胺,限制性内切酶缓冲液,BSA等)来完成酶切。本回答被提问者和网友采纳
第2个回答 2015-12-05
PCR产物经PCR纯化试剂盒纯化后,可以做EcoRI和BamHI的双酶切。酶切、纯化都可以用PCR纯化试剂盒完成,只有一种情况例外,PCR模板为质粒,且这个质粒和要用的载体有相同的抗性。此时需要跑一次胶来丢掉模板质粒,否则在连接产物转化的平板上长出的菌落许多是模板质粒,而不是你所构建的质粒。
PCR产物不经纯化也可以直接酶切,但也很麻烦,效果可能不会很好,可能需要添加其他东西(亚精胺,限制性内切酶缓冲液,BSA等)来完成酶切。
第3个回答 2015-01-31
PCR是DNA的体外扩增技术.
DNA复制是有生命力的细胞在体内 自我复制的过程 ,属于体内扩增.
PCR(聚合酶链式反应)原理
PCR是体外酶促合成特异DNA片段的方法,主要由高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成: 即在高温(95℃)下,待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板;而后在低温(37~55℃)情况下,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链;在Taq酶的最适温度(72℃)下,以引物3’端为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿模板以5’→3’方向延伸,合成DNA新链。这样,每一双链的DNA模板,经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行,每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板,每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍,PCR产物得以2n的批数形式迅速扩增,经过25~30个循环后,理论上可使基因扩增109倍以上,实际上一般可达106~107倍。