做基因多态性，PCR产物必须纯化后才能酶切吗

Question

我做人脂联素基因多态性，PCR产物后要用Hha Ⅰ做酶切，PCR产物一定要纯化后才能酶切吗？我看网上说要纯化，但打电话问大连宝工说可以不纯化直接酶切。究竟要怎么做？对了PCR产物一般怎么保存，能保存多久？还请各位前辈给予指点，谢谢！

Answer 1

博凌科为-为你解答：如果你不纯化，直接做酶切不是不行，而是PCR产物里面缓冲液并不是合适的酶切缓冲液，会极大的影响酶切的效率。甚至于根本就切不开，即便你隔夜酶切。 你可以自己检查一下那些用来做酶切的缓冲液（A，B，C，D，E，H，Multi－Core）之间成分的差别，和酶在各个不同缓冲液的效率的差别，你就知道缓冲液用不合适会对酶切效率有多大的影响。与其浪费内切酶和时间，何必呢，你还不如纯化后酶切，只不过多了个步骤而已。至于PCR产物的保存，没有什么特殊要求，反应结束后你可以直接冻在－20。也可以跑电泳后切下你的目的条带放在四度，如果是纯化了保存，如果你不反复冻融的话，放几年没有问题。DNA是很稳定的

Answer 2

我们做的时候不纯化，最近做酶切的话放四度保存，以后酶切放负二十保存。不用反复冻融。我们基本是上午pcr下午酶切过夜，次日早晨拿出来跑电泳看结果