66问答网
所有问题
若DNA需要使用两种酶进行酶切,应如何进行?
如题所述
举报该问题
推荐答案 2012-06-09
如果能够找到让两种酶同时作用的最佳
缓冲液
NEBuffer,那就可以同时双酶切。如果找不到就只能采用分步酶切。分步酶切应从反应要求盐浓度低的酶开始,酶切完毕后再调整盐浓度直至满足第二种酶的要求,然后加入第二种酶完成双酶切反应。NEBuffer的组成及
内切酶
在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液里的活性表》及每支酶的说明书。
温馨提示:答案为网友推荐,仅供参考
当前网址:
http://66.wendadaohang.com/zd/DpsUpxDx9.html
其他回答
第1个回答 2012-06-19
可以在同一个反应体系中进行双酶切或者先一个酶切后纯化再使用另外一个酶酶切。
第2个回答 2012-06-13
建议你参考Takle参考书,每个生物实验室都必备的,是否能够同步酶切,同步酶切的最佳缓冲液是什么,所需酶切温度和时间等,都要查找清楚
相似回答
常用的
酶切
有哪些方法?
答:
(1)单酶切法:这是用一种限制性内切核酸酶酶切DNA样品
。若DNA样品是环状DNA分子,完全酶切后,产生与识别序列数(n)相同的DNA片段数,并且DNA片段的两末端相同。若DNA样品本来就是线形DNA片段,完全酶切的结果,产生n+1个DNA片段数,其中有两个片段的一端仍保留原来的末端。(2)双酶切法:...
酶切
技术双酶切
答:
选择能最大程度保持两种酶活性的缓冲液进行双酶切,
如果非最优条件影响切割速率,可以根据具体酶的活性调整酶量和反应时间
。在某些情况下,如果找不到同时适用于两种酶的缓冲液,就需要采取分步酶切。步骤是首先从对盐浓度要求较低的酶开始,完成酶切后逐渐调整盐浓度以适应第二种酶的需求,接着加入第...
DNA
限制性内切
酶酶切
影响因素
答:
如果两种酶需要在不同的盐浓度下工作
,
操作顺序是先使用低盐浓度的酶,然后调整到所需的浓度,再进行高盐浓度的酶切
。若需要在不同酶之间进行切换,可以先通过酚/氯仿抽提处理,添加适量的NaAc和无水乙醇,混合后冷藏,离心、干燥,最后重新溶于缓冲液进行下一轮酶切反应。
bbs1
酶切
温度
答:
这时可以采用如下措施解决:
1、先用一种酶切,然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一种酶切
。2、先进行低盐要求的酶切,然后添加盐离子浓度到高盐的酶反应要求,加入第二种酶进行酶切。3、使用通用缓冲液进行双酶切,具体要根据酶的反应要求进行,尽量避免活力损失。
构建重组表达质粒前,还
需要
将空表达载体和重组克隆质粒
进行
双
酶切
...
答:
是的,在构建重组表达质粒之前,通常需要对空表达载体和重组克隆质粒进行双
酶切
。双酶切是指
使用两种
限制性内切酶对
DNA进行
切割,以产生互补的黏性末端或平滑末端。这样可以将重组克隆质粒的目标片段与空表达载体进行连接,形成重组表达质粒。具体操作步骤如下:1. 选择适当的限制性内切酶,确定其酶切位点。...
双
酶切
的问题
答:
实在没有很好的通用buffer,那么你需要延长
酶切
时间。用单酶切不是不可以,但质粒自连的可能性会很大,这种情况下,你可以用碱性磷酸酶处理后再进行连接,但自连可能性还是有的。醇沉法就是加入两倍体积的乙醇,然后在-20或者-70中放置15-30min,接着进行短暂低速离心(1-2Min,5000 rpm左右),弃...
大家正在搜
在DNA的酶切反应系统中
各种酶的酶切位点
DNA酶切与检测
DNA酶切与连接检测
基因文库用什么酶切
酶切酶连
限制性酶切酶
限制酶的酶切序列
酶切反应
相关问题
两种酶的反应缓冲液不一样,做双酶切时如何处理?
双酶切,两个酶温度不同怎么办
实验室条件下如何进行限制性酶切实验
酶切法原理
质粒DNA,酶切产物的片段大小应该为多少
当两种限制性内切酶的作用条件不相同时,若要进行双酶切,应采取...
为什么要对重组质粒DNA进行双酶切
酶切后的DNA可直接乙醇沉淀吗