科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大肠杆菌中成功表达．如图表示构建重组质粒和筛选含

Question

科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大肠杆菌中成功表达．如图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程．请据图回答：（1）步骤①和②中常用的工具酶有______．（2）经过①和②步骤后，有些质粒上的______基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒．（3）步骤③是______的过程．（4）步骤④：将三角瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养，目的是筛选______．能在C中生长的大肠杆菌有______种．（5）步骤⑤：用无菌牙签挑取C上的单个菌落，分别接种到D（含氨苄青霉素和四环素）和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示．含目的基因的菌落位于（选填“D”或“E”）______上，请在图中相应的位置上圈出来．

Answer 1

（1）将质粒切割开用限制酶，将目的基因与质粒连接起来用DNA连接酶．
（2）由图中限制酶切割位置可知，目的基因插入的位置是氨苄青霉素抗性基因中．
（3）步骤③是基因工程第三步：将目的基因导入受体细胞．
（4）培养基C是选择培养基，培养基中有四环素，专一筛选含四环素抗性基因的大肠杆菌，能在C中生长的大肠杆菌有两种，分别是抗四环素和同时抗四环素和含氨苄青霉素的大肠杆菌．
（5）D培养基中大肠杆菌对四环素和含氨苄青霉素都抗，而E中只抗一种四环素，所以在E中对应区域（D中没有菌落的部位），该处为转基因大肠杆菌．
答案：
（1）限制性内切酶、DNA连接酶
（2）氨苄青霉素抗性 
（3）将重组质粒（目的基因）导入大肠杆菌（受体细胞） 
（4）含四环素抗性基因的大肠杆菌      2  
 （5）E