一到高中生物题

Question

科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大肠杆菌中成功表达。下图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程。请据图回答：
（1）步骤①和②中常用的工具没是 。（2）经过①和②步骤后，有些质粒上的 基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒。（3）步骤③是 的过程。为了促进该过程，应该用 处理大肠杆菌。（4）步骤④：将三角瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养，目的是筛选 。能在C中生长的大肠杆菌有 种。（5）步骤⑤:用无菌牙签挑取C上的单个菌落，分别接种到D（含氨苄青霉素和四环素）和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。含目的基因的菌落位于（选填“D”或“E”） 上，请在图中相应的位置上圈出来。答案是
（1）限制性核酸内切酶、DNA连接酶
（2）氨苄青霉素抗性 （3）将重组质粒（目的基因）导入大肠杆菌（受体细胞） CaCl2（4）含四环素抗性基因的大肠杆菌 2 （5）E 圈圈在E中第一排第二个和第四排第一个

我觉得很奇怪，第五小题中D是含氨苄青霉素和四环素的培养基，不能生长在D上的菌落是导入重组质粒的菌落，剩下能生长的是导入原质粒的菌落，而E中无法辨别出菌落是导入重组质粒的还是导入原质粒的，那么说明含目的基因的菌落是D中不能生长的菌落，答案中圈却圈在E中与之位置对应的菌落上，为什么就能保证E中的所有菌落能与D中的一一对应呢？
请各位帮忙解释一下

Answer 1

额……这个是微生物培养里的印章法
就是拿绒布做一个印章，先在E中轻轻接触，然后以同样位置印到D培养基里，这样的话，就能保证每个菌落都能一一对应了。

Answer 2

因为目的基因的插入破坏了质粒内部的氨苄青霉素抗性基因，所以正确的重组质粒会在E中正常生长，而在D中不能生长

Answer 3

C上的单个菌落，是被分别接种到D（含氨苄青霉素和四环素）和E（含四环素）两个培养基的“相同位置”上，实验过程中菌落的接种顺序已经在两个培养皿上做了标记。应该没有问题的，如果有条件，这个实验自己做一下就会很清楚的。

Answer 4

??

Answer 5

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