科学家将人的生长素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中的以表达．操作过程如图，请

Question

科学家将人的生长素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中的以表达．操作过程如图，请根据图回答问题：（1）获取目的基因的方法，一是______；二是______．过程（1）表示的是采取______的方法来获取目的基因．（2）图中（1）过程是以原______为模板，______形成DNA单链，再进一步合成DNA双链．（3）如何使目的基因与质粒结合形成重组质粒？答：______．（4）图中（1）过程用人工方法，使体外重组的DNA分子转移到受体细胞内，主要是借鉴细菌或病毒______细胞的途径．一般将受体大肠杆菌用______处理，使含有目的基因的重组质粒容易进入受体细胞．（5）目前把重组质粒导入细菌细胞时效率不高，有的只导入普通质粒A，只有极少数导入的是重组质粒，而大部分根本没有导入质粒．检测大肠杆菌B是否导入质粒或重组质粒开采用的方法是______，原理是______．（6）如果把已经导入普通质粒A或重组质粒的大肠杆菌，放在含有四环素的培养基上培养，发生的现象是______，原理是______．

Answer 1

（1）获取目的基因的方法，一是从供体细胞的DNA中直接分离基因；二是人工合成基因．由图可知，过程（1）表示以生长素的RNA为模板反转录合成目的基因．
（2）图中（1）过程是以原mRNA为模板，逆转录形成DNA单链，再进一步合成DNA双链．
（3）先用同一种限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒，露出相对应的粘性末端，再用DNA连接酶使两者的粘性末端结合形成重组质粒．
（4）过程③表示借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径将目的基因导入受体细胞．受体细胞是微生物时，一般用Cacl₂（Ca²⁺）处理，以增大细胞壁的通透性，使细胞成为感受态细胞，易于含有目的基因的重组质粒进入受体细胞．
（5）由图可知，质粒上含有四环素抗性基因和氨苄青霉素的抗性基因．构建基因表达载体时，破环了质粒上的四环素抗性基因，但没有破环氨苄青霉素的抗性基因，所以导入普通质粒或重组质粒的大肠杆菌都能抗氨苄青霉素，都能在含有氨苄青霉素的培养基上生长．
（6）由第五小题分析可知，把已经导入了普通质粒或重组质粒的大肠杆菌，放在含有四环素的培养基上培养，导入普通质粒的大肠杆菌能生长，导入重组质粒的大肠杆菌不能生长，因为目的基因正插在四环素抗性基因中，破坏了其结构和功能．
故答案为：
（1）从供体细胞的DNA中直接分离基因；  人工合成基因．    逆转录
（2）mRNA         逆转录
（3）先用同一种限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒，露出相对应的粘性末端，再用DNA连接酶使两者的粘性末端结合
（4）侵染  CaCl₂
（5）将得到的大肠杆菌B涂布在含有氨苄青霉素的培养基上培养，能够生长的，说明已经导入了质粒或重组质粒；反之，则没有导入    普通质粒和重组质粒上有抗氨苄青霉素基因
（6）有的生长，有的不生长    导入普通质粒A的细菌生长，因为普通质粒A上有四环素抗性基因；导入重组质粒的细菌不生长，因为目的基因正插在四环素抗性基因上，破坏了其结构功能