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提高外源基因表达效率的方法有哪些
如题所述
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推荐答案 2015-12-12
提高外源基因表达效率的途径有很多,可以归纳如下:
⑴提高启动子强度。
⑵缩短启动子同克隆基因间距离。
⑶高效的翻译起始序列。
⑷高效的转录终止区。
⑸提高质粒拷贝数及稳定性。
⑹用以下方法提高翻译水平:①调整SD序列与AUG间的距离;②用点突变的方法改变某些碱基;③增加mRNA的稳定性的。
⑺减轻细胞的代谢负荷:①诱导表达;②表达载体的诱导复制。
⑻提高表达蛋白的稳定性,防止其降:①克隆一段原核序列,表达
融合蛋白
;②采用某种突变菌株;③表达分泌蛋白质。
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要实现
外源基因
有效
表达
,如何进行诱导表达,诱导后为什么可以表达
答:
提高外源基因表达效率的途径有很多,
可以归纳如下:⑴提高启动子强度,⑵缩短启动子同克隆基因间距离 ⑶高效的翻译起始序列 ⑷高效的转录终止区 ⑸提高质粒拷贝数及稳定性
⑹用以下方法提高翻译水平:
①调整SD序列与AUG间的距离
②用点突变的方法改变某些碱基③增加mRNA的稳定性的⑺减轻细胞的代谢负荷:①诱导...
如何有效地
提高外源基因
在大肠杆菌中的
表达效率
答:
1.优化发酵条件
,包括诱导时间这些因素.2.优化密码子(偏好密码子)
3.换启动子 4.换载体 5.换宿主菌
如何为
外源
高效降解菌提供良好条件,发挥生物强化作用
答:
在发酵罐内工程菌 生长到一定的阶段后,开始诱导外源基因的表达,
诱导的方式包括添加特异性诱导物和改变培养温度等
。使外源基因在特异的时空进行表达不仅有利于细胞的生长代 谢,而且能提高表达产物的产率。生物因素的第三方面是提高外源基因表达产物的总量。外源基因表达产物的总量取决于外源基因表达水平和菌...
影响
外源基因表达的
基因主要
有哪些
答:
1. 启动子的强弱:有效的转录起始是外源基因高效表达的关键
,因此选择强且可调控的启动子至关重要。2.
核糖体结合位点的有效性
:SD序列的存在对原核细胞mRNA翻译起始至关重要。3.
SD序列和起始密码子
AUG的间距:适当的距离有利于提高翻译效率。4. 密码子组成:避免使用罕用密码子可以提高表达效率。5....
转
基因
技术的运用
答:
此
方法
目前应用较普遍,现在的转基因动物研究大都是在Palmiter等方法的基础上有所改进而进行的。王敏华(1996)报道用显微注射法转移抗瘟病毒核酸酶基因,获得了转基因兔。KrimPenfort运用体外培养胚胎再施用显微注射法获得了转基因牛 这种方法的特点是
外源基因的
导入整合
效率
较高,不需要载体,直接转移目的...
如何
提高
DNA片段的转化率
答:
一般采用
提高
DNA的浓度来增加重组DNA分子的比例,DNA浓度太稀,质粒自连比率将会上升。当底物浓度过高时,连接效果也很差,这可能是分子运动受到阻挠。载体DNA和
外源基因的
比例也要合适,否则将会降低重组分子的机率。(4)其它干扰因素反应液中残余微量物质也可能干扰酶反应,例如,EDTA的存在会抑制酶的活性。DNA样品中如有...
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