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如何提高外源基因的表达
在基因工程制药中要想
提高外源基因
在工程菌中
的表达
量应该从哪些方面考...
答:
从以下5个方面考虑1.优化发酵条件
,包括诱导时间这些因素.2.优化密码子(偏好密码子)3.换启动子4.换载体5.
换宿主菌
如何
有效地
提高外源基因
在大肠杆菌中
的表达
效率
答:
1.优化发酵条件
,包括诱导时间这些因素.2.优化密码子(偏好密码子)
3.换启动子 4.换载体 5.换宿主菌
提高外源基因表达
效率的方法有哪些
答:
提高外源基因表达效率的途径有很多,
可以归纳如下:⑴提高启动子强度。⑵缩短启动子同克隆基因间距离。⑶高效的翻译起始序列
。
⑷高效的转录终止区
。
⑸提高质粒拷贝数及稳定性
。⑹用以下方法提高翻译水平:
①调整SD序列与AUG间的距离
;②用点突变的方法改变某些碱基;③增加mRNA的稳定性的。⑺减轻细胞的代谢...
要实现
外源基因
有效
表达
,
如何
进行诱导表达,诱导后为什么可以表达
答:
提高外源基因表达效率的途径有很多,可以归纳如下:
⑴提高启动子强度,⑵缩短启动子同克隆基因间距离 ⑶高效的翻译起始序列 ⑷高效的转录终止区 ⑸提高质粒拷贝数及稳定性
⑹用以下方法提高翻译水平:
①调整SD序列与AUG间的距离
②用点突变的方法改变某些碱基③增加mRNA的稳定性的⑺减轻细胞的代谢负荷:①诱导...
如何提高
转基因动物中
外源基因的
整合率与
表达
率
答:
在显微镜下,使其具有携带外源基因的能力:
(1)核显微注射法
核显微注射法是动物转基因技术中最常用的方法。在母畜所生的后代中常用的动物转基因技术,然后将供体细胞细胞核移植到受体细胞——去核卵母细胞。 (2)精子介导的基因转移 精子介导的基因转移是把精子作适当处理后。(3)核移植转基因法 体细胞...
如何提高外源基因
片段在原核细胞中
的表达
量
答:
构建载体的时候,考虑用具有强启动子的载体并且能够在大肠杆菌中
表达
重组蛋白的载体,比如pET系列的载体,转入的宿主菌要求是表达形的,比如BL21等。在表达过程中,注意摸索诱导剂IPTG的量、诱导时间及培养温度。多次摸索就可以找到一个最佳方案,因为蛋白表达是一个载体+宿主菌+培养条件的优化组合的选取。你...
如何提高外源基因
在大肠杆菌中
的表达
分子生物学
答:
首先 你要确定你酶切和连接都是正确的,这个就得自己摸条件了。其次 我建议二次转化,也就是首先选用DH5α或者Top10这类
的表达
扩增型感受态细胞转换一次,再用所得到的单克隆转入BL21这类的表达感受态细胞,这样可以有效的
提高表达
量。
如何提高外源基因
片段在原核细胞中
表达
量
答:
到了蛋白
表达
这步, 首先选择在什么细胞系里表达啦. 原核细胞(大肠杆菌吧)一般要试不同的strain (细胞系), 有的是翻译系统经过优化的( 例如使信使RNA更稳定啦,
增加
几个罕见的转运RNA来对应那些罕见的密码子啦), 有的是细胞里有辅助蛋白的 (使你要表达的蛋白能准确折叠). 转化涂板之后得到很多...
简述
外源基因
在大肠杆菌中高效
表达
的基本原理
答:
外源基因
在大肠杆菌中高效
表达
的基本原理,包括:强化蛋白质生物的合成(拷贝数、转录水平、mRNA 的翻译控制)、抑制蛋白质产物的降解、维持和恢复蛋白质特向异性空间构象三方面。将外源基因导入生物体的过程称为转化。这可以自然发生,也可以人为发生。人工转化转染方法包括:化学方法,有磷酸钙沉淀法、DEAE ...
包涵体怎样产生的,
怎样提高
大肠杆菌中
外源
蛋白可溶性
表达
答:
简单的说,就是
外源基因
在大肠杆菌胞内
表达
的过程中,因为某些错误的折叠,形成的不溶的无活性的固体颗粒。形成的原因很复杂,比如表达量过高,无法糖基化,组成中含有较多的半胱氨酸之类的氨基酸,离子键疏水键共价键共同的化学作用等。
提高
可溶表达的方法也很多 1,降低诱导温度,比如16度诱导。绝大多数...
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