如何有效地提高外源基因在大肠杆菌中的表达效率

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推荐答案 2016-12-09

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简述外源基因在大肠杆菌中高效表达的基本原理答：外源基因在大肠杆菌中高效表达的基本原理，包括：强化蛋白质生物的合成（拷贝数、转录水平、mRNA 的翻译控制）、抑制蛋白质产物的降解、维持和恢复蛋白质特向异性空间构象三方面。将外源基因导入生物体的过程称为转化。这可以自然发生，也可以人为发生。人工转化转染方法包括：化学方法，有磷酸钙沉淀法、DEAE ...

影响外源基因在大肠杆菌中高效且活性表达的主要因素有哪些答：①组建融合基因，产生融合蛋白。融合蛋白的载体部分通过构象的改变，使外源蛋白不被选择性降解。这种通过产生融合蛋白表达外源基因，特别是相对分子质量较小的多肽或蛋白编码的基因，尤为合适。②产生可分泌的蛋白。如将外源基因表达产物分泌到大肠杆菌细胞的周质或直接分泌到培养基。③外源蛋白可以在宿主细胞...

如何提高外源基因在大肠杆菌中的表达 分子生物学答：首先你要确定你酶切和连接都是正确的，这个就得自己摸条件了。其次我建议二次转化，也就是首先选用DH5α或者Top10这类的表达扩增型感受态细胞转换一次，再用所得到的单克隆转入BL21这类的表达感受态细胞，这样可以有效的提高表达量。

包涵体怎样产生的,怎样提高大肠杆菌中外源蛋白可溶性表达答：1，降低诱导温度，比如16度诱导。绝大多数蛋白质在降低诱导温度后可以明显提高可溶表达。2，降低诱导剂的用量，比如0.1mM IPTG诱导。甚至更极端的可以不加诱导剂，形成泄漏表达。这种情况下表达出来的蛋白一定是可溶表达。3，更换不同的表达载体，表达菌株。比如个人感觉pET28比pET21，Rosetta的菌株比BL21(...

外源基因在大肠杆菌中的表达问题答：2．载体的选择所用表达载体必须是大肠杆菌表达载体，含有大肠杆菌RNA聚合酶所能识别的启动子（如PL、tac、T7等）和SD序列。(1)核糖体结合位点 外源基因在大肠杆菌细胞中的高效表达不仅取决于转录启动的频率，而且在很大程度上还与mRNA的翻译起始效率密切相关。大肠杆菌细胞中结构不同的mRNA分子具有不同...

简述外源基因在大肠杆菌中高效表达的基本原理答：外源基因通过载体质粒导入到了受体细胞大肠杆菌中，已经被整合到载体质粒中加以保护，因为大肠杆菌本身也存在质粒，所以外源基因不会被切割，与其它质粒一样得以表达。

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