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如何有效地提高外源基因在大肠杆菌中的表达效率
如题所述
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第1个回答 2011-05-20
1. 优化发酵条件,包括诱导时间这些因素。
2. 优化密码子(偏好密码子)
3. 换启动子
4. 换载体
5. 换宿主菌
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简述
外源基因在大肠杆菌中
高效
表达
的基本原理
答:
外源基因在大肠杆菌中高效表达的基本原理,
包括:强化蛋白质生物的合成(拷贝数、转录水平、mRNA 的翻译控制)、抑制蛋白质产物的降解、维持和恢复蛋白质特向异性空间构象三方面
。将外源基因导入生物体的过程称为转化。这可以自然发生,也可以人为发生。人工转化转染方法包括:化学方法,有磷酸钙沉淀法、DEAE ...
影响
外源基因在大肠杆菌中
高效且活性
表达
的主要因素有哪些
答:
①组建融合基因,产生融合蛋白
。融合蛋白的载体部分通过构象的改变,使外源蛋白不被选择性降解。这种通过产生融合蛋白表达外源基因,特别是相对分子 质量较小的多肽或蛋白编码的基因,尤为合适。②产生可分泌的蛋白。如将外源基因表达产物分泌到大肠杆菌细胞的周质或直接分泌到培养基。③外源蛋白可以在宿主细胞...
如何提高外源基因在大肠杆菌中的表达
分子生物学
答:
首先 你要确定你酶切和连接都是正确的,这个就得自己摸条件了
。其次 我建议二次转化,也就是首先选用DH5α或者Top10这类的表达扩增型感受态细胞转换一次,再用所得到的单克隆转入BL21这类的表达感受态细胞,这样可以有效的提高表达量。
包涵体怎样产生的,
怎样提高大肠杆菌中外源
蛋白可溶性
表达
答:
1,
降低诱导温度
,比如16度诱导。绝大多数蛋白质在降低诱导温度后可以明显提高可溶表达。2,
降低诱导剂的用量
,比如0.1mM
IPTG诱导
。甚至更极端的可以不加诱导剂,形成泄漏表达。这种情况下表达出来的蛋白一定是可溶表达。3,更换不同的表达载体,表达菌株。比如个人感觉pET28比pET21,Rosetta的菌株比BL21(...
外源基因在大肠杆菌中的表达
问题
答:
2.载体的选择 所用
表达
载体必须是大肠杆菌表达载体,含有大肠杆菌RNA聚合酶所能识别的启动子(如PL、tac、T7等)和SD序列。(1)核糖体结合位点
外源基因在大肠杆菌
细胞中的高效表达不仅取决于转录启动的频率,而且在很大程度上还与mRNA的翻译起始
效率
密切相关。大肠杆菌细胞中结构不同的mRNA分子具有不同...
简述
外源基因在大肠杆菌中
高效
表达
的基本原理
答:
外源基因
通过载体质粒导入到了受体细胞
大肠杆菌中
,已经被整合到载体质粒中加以保护,因为大肠杆菌本身也存在质粒,所以外源基因不会被切割,与其它质粒一样得以
表达
。
大家正在搜
外源基因在大肠杆菌中的高效表达
外源基因在大肠杆菌中的诱导表达
大肠杆菌高效表达外源基因基本原理
外源基因在大肠杆菌的表达
大肠杆菌表达外源基因影响原因
基因在大肠杆菌中表达
影响大肠杆菌高效表达的因素
如何高效表达外源基因
外源基因的高效表达
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