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为什么再做WESTEN-BLOT时跑电泳时没有条带,而在用BCA法测蛋白浓度时却有数值呢?
谢谢,本人是刚刚从事这方面的工作,忘有经验的学者,前辈们多多指教。期待大家的帮助。
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推荐答案 2011-05-02
westernblot检测是用特定抗体检测特定蛋白,BCA法是检测蛋白浓度,即使BCA法检测蛋白浓度高,但也不一定有你检测的蛋白啊?还有你要保证你westernblot操作没问题哦,最好做个内参。
温馨提示:答案为网友推荐,仅供参考
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第1个回答 2011-05-13
跑完电泳后可以用考马斯亮蓝染胶看看有没有条带,如果蛋白提取过程是严格的,同时可以测到蛋白浓度,一般在染色1小时左右就可看到清晰的不同分子量的条带。考马斯亮蓝看到蛋白后,下一次转好膜后可以用立春红染膜,同样看到蛋白条带证明已经转膜成功。希望我的解答对你有所帮助。
相似回答
...有蛋白
条带,而在用BCA法测蛋白浓度时却有数值呢?
谢谢!!
答:
染色方法对不对?如果所需验证的蛋白含量很少,银染分辨率比考然高。会不会跑胶跑过头了?
western
blot
的内参不一致,急求助
答:
我们知道,要用Western
Blot
比较不同条件下或者不同组织中,目的蛋白表达量的相对多少,前提条件是等量的细胞上样,才有比较的基础,特别表达量不高时,上样量的差别就很可能影响结果的分析,所以需要内参。在国外发表的文章中,Western Blotting 实验结果须进行内参校正已成为一种惯例。但是,国内仍有不少科研人员在Western ...
为什么
我
用BCA蛋白
试剂盒测定
蛋白浓度时,测
得的浓度和我估计的浓度相差...
答:
可能是配置的时候出现了误差,配置不精确
。BCA 受反应温度和反应时间影响较大,可能是反应时间还不够
为什么
标准曲线法与计算法测定的
蛋白质数值
有差异?
答:
因为标准曲线有误差
bca
试剂盒
测蛋白浓度
的时候 sds有
没有
影响
答:
BCA法
测定
蛋白浓度
不受绝大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞裂解实验中,常用浓度的去垢剂SDS,Triton X-100,Tween不影响检测结果,但受螯合剂(EDTA,EGTA)、还原剂(DTT,巯基乙醇)和脂类的影响
做好western
blot
需要注意各种细节,转给需要的你!
答:
使用完在实验仪器使用本上做好登记。 注意:避免蓝色条带跑出分离胶,这样有可能目的蛋白也已经跑出,所以在分离胶底部出现一条整齐水平的蓝色
条带时,
即停止电泳。 Little Trick 1.
电泳时
插好正负极后,从电泳槽底会有小气泡上升,气泡的数目和上升速率与电压大小呈正比。若小气泡和往常不太一样,观察几分钟后还是...
大家正在搜
电泳时不加SDS有什么后果
电泳跑到什么时候停
为什么电泳时会出现拖尾现象
跑电泳时每孔加多少样
跑电泳时中间可以暂停吗
跑电泳的时候会产生小气泡
跑电泳时间太长会怎样
电泳跑胶时间过长
跑电泳时加的金显色
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