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pcr产物纯化方式
分子生物学中应该知道的那些事儿(二)
答:
如果确定反应体系中,有
PCR产物
且浓度不低,可以保留过柱后的液体,如果DNA没有发生结合,还可以进行挽救,重新进行
纯化
。 二、DNA连接酶工作原理 DNA连接酶(EC 6.5.1.1)以共价
方式
将DNA的磷酸骨架与平末端或配对的粘性末端连接起来,其作用是修复DNA分子中断裂的双链。在分子生物学中,它通常用于将限制性内切酶产生的DN...
pcr产物
没有
纯化
能够直接进行双酶切吗?
答:
不可以。首先,采用的是质粒模板;其次,扩增得到的非单一条带,如果不
纯化
直接酶切,那么得到的将是带有相应酶切位点的几种片段,继续试验的话,菌落PCR鉴定时可能会出现几种不同大小的条带。第三、
PCR产物
里面缓冲液并不是合适的酶切缓冲液,会极大的影响酶切的效率。甚至于根本就切不开,即便是...
做基因多态性,
PCR产物
必须
纯化
后才能酶切吗
答:
你可以自己检查一下那些用来做酶切的缓冲液(A,B,C,D,E,H,Multi-Core)之间成分的差别,和酶在各个不同缓冲液的效率的差别,你就知道缓冲液用不合适会对酶切效率有多大的影响。与其浪费内切酶和时间,何必呢,你还不如
纯化
后酶切,只不过多了个步骤而已。至于
PCR产物
的保存,没有什么特殊要...
pcr
试验是什么意思?
答:
引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行PCR扩增时,扩增出的
PCR产物
为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。 靶序列或扩增产物的交叉污染:这种污染有两种原因:一是整个基因组或大片段的交叉污染,导致假阳性。这种假阳性可用以下
方法
解决:操作时应小心轻柔,...
SYBR Green ISybr Green I染料法操作过程
答:
1.3 Real-time
PCR
反应分为两步:
方法
学确认:通过PCR扩增
产物
,进行
纯化
并制作10倍梯度稀释的标准品,选择合适的模板进行PCR。PCR反应:使用上海之江生物科技有限公司合成的引物,体系包括Buffer、dNTPs、MgCl2、Taq酶、模板和引物,按照预设热循环参数运行,GAPDH作为内参照基因,EMMPRIN作为目的基因进行检测...
如何理解
pcr
扩增的原理和过程
答:
PCR
原理 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计...
转化大肠杆菌之前用了
PCR纯化
,会不会有影响
答:
如果是在连接试验后,再用试剂盒纯化一次,这会对实验有很大的影响:1、纯化过程本身会有较大损失,起始量约少,相对损失就越大;2.
pcr的纯化
试剂盒往往是针对小片段(100-5k bp以内)DNA的,对于质粒,其回收效率可能进一步下降;所以,这样极有可能导致转化效率大幅下降,但如果你的连接
产物
本身较易...
pcr的产物
可以不可以直接拿来做模板再进行pcr
答:
一般不建议这样做。除非你做巢式PCR。以
PCR产物
作为模板,首先必须保证你的PCR产物经过
纯化
,成分单一,因此,无论怎样,第一轮PCR产物都要进行纯化,并且必须使用高保真酶以减少碱基错配的可能。这样才能以第一轮PCR产物为模板进行第二轮扩增。(用于巢式pcr)....
做完
PCR
和酶切后为什么要做
纯化
?
答:
因为你做
pcr
和酶切都会引入很多试剂啊离子啊什么的可能影响后一步实验 而且你做酶切后不
纯化
的话 切下来的片段还在那里可能发生自连
pcr产物
条带浅可以做模板吗
答:
pcr产物
条带浅不可以做模板一般不建议这样做。除非你做巢式PCR。以
PCR产物
作为模板,首先必须保证你的PCR产物经过
纯化
,成分单一,因此,无论怎样,第一轮PCR产物都要进行纯化,并且必须使用高保真酶以减少碱基错配的可能。这样才能以第一轮PCR产物为模板进行第二轮扩增。
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