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pcr产物纯化方式
过短的
PCR产物
为什么不适于直接测序?
答:
首先过短的
PCR产物纯化
困难,一般的PCR产物纯化试剂盒都要求PCR产物片段大于150bp,过短的 PCR产物纯化和准确定量都非常困难。因此我们要求用于测序的PCR产物一般不低于150bp长度。其次,由于测序技术本身的限制,测序反应对环境的干扰比较敏感,模板太短的PCR测序受外界的 干扰更大,很容易造成测序失败。---...
有没有做菌种鉴定测出来叶绿体基因
答:
菌种鉴定
的方法
一般有常规鉴定和分子生物学方法:(1)常规鉴定:菌落形态观察、革兰氏染色、菌毛染色、糖类分解实验、吲哚实验、淀粉水解实验、V-P实验、甲基红实验、柠檬酸盐利用实验、硝酸盐还原实验、接触酶实验等 (2)分子生物学方法:细菌16SrDNA菌种鉴定:提取DNA,特定引物PCR扩增,
PCR产物纯化
测序...
PCR的
原理是什么
答:
PCR
原理:DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应...
关于基因的调取,具体的步骤
答:
上游引物从ORF的起始子开始,下游则从终止子开始。然后,你要提取你目标基因可能表达的组织的总RNA,然后将总RNA反转录成为cDNA,接着利用cDNA作为模板,以你设计的引物进行PCR扩增。得到的PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测没有问题后,
纯化PCR产物
,然后将这个PCR产物连接至T克隆载体上,转化大肠杆菌,进行蓝白...
DNA跑完胶后为什么要进行
纯化PCR
后的DNA
答:
因为
PCR产物
中还有没有反应掉的ddNTP、金属离子、Taq酶.尤其是金属离子,对连接的干扰作用较大.
纯化
得到的DNA还能
PCR
吗 如何图稿DNA浓度
答:
一,可以
pcr
。
纯化
的本质是去除蛋白质和一些其他物质,使你的dna纯度更高,所以当然可以pcr,而且有的时候由于dna不纯,甚至会干扰pcr。二,纯化的时候会损失一些dna,只能说纯度提高,但是本质上dna含量会减少,至于浓度在于你溶解dna的液体体积吧~~~三,至于提的dna浓度不高,一般在于自己的操作(如果...
PCR产物
不做
纯化
和胶回收,直接TA克隆可以吗
答:
不可,影响下面的酶切酶连活性 涉及酶的操作都不要疏忽,酶对反应条件相应要求较高,
pcr
体系里,看着澄清透明,看不见的是pH值,盐离子浓度,都会给内切酶带来麻烦。当然不排除有很小几率做出后续试验(本人师兄拿自来水都能提出RNA来,叹服),理论上一定要回收的 ...
乳杆菌16srDNA序列分析 先提取DNA然后
PCR
,扩增后
纯化
一下直接送去测序...
答:
PCR纯化
之后直接送测序也是可以的,但是测序结果前面有几十个碱基是不准确的 所以严格来讲还是应该克隆后再测序,选用克隆载体上的引物可以完整准确的测出16SR序列
克隆原理是什么?
答:
克降是利用生物技术由无性生殖产生与原个体有完全相同基因组织后代的过程。科学家把人工遗传操作动物繁殖的过程叫克降,这门生物技术叫克隆技术,含义是无性繁殖。克隆技术在现代生物学中被称为“生物放大技术”。无性生殖是指未经两性生殖细胞结合的生殖
方式
或者自然的无性生殖方式。一个克隆就是一个多...
PCR产物
可以直接测序吗
答:
浓度过低又会降低
PCR产物
的产量。dNTP能与Mg2+结合,使游离的Mg2+浓度降低。 模板(靶基因)核酸 模板核酸的量与纯化程度,是PCR成败与否的关键环节之一,传统的DNA
纯化方法
通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。 SDS的主要功能是: 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜,并解离细胞中的核蛋白,SDS ...
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