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pcr产物纯化方式
pcr产物
条带浅可以做模板吗
答:
pcr产物
条带浅不可以做模板一般不建议这样做。除非你做巢式PCR。以
PCR产物
作为模板,首先必须保证你的PCR产物经过
纯化
,成分单一,因此,无论怎样,第一轮PCR产物都要进行纯化,并且必须使用高保真酶以减少碱基错配的可能。这样才能以第一轮PCR产物为模板进行第二轮扩增。
PCR的
原理是什么
答:
PCR
原理:DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应...
引物会引起
PCR产物
的峰干扰。
答:
当引物恰好设计在重复序列中时,那么在重复序列以外的部分就会出现Twopattern的情况;所用的测序引物不纯,这种情况一般发生在
PCR产物
测序中。因为PCR测序一般使用的都是PCR扩增引物,如果引物本身不纯,测序结果会出现双峰。所以我们测序的引物一般要求都是要经过PAGE
纯化
的;测序样品序列中存在如重复序列,...
克隆原理是什么?
答:
克降是利用生物技术由无性生殖产生与原个体有完全相同基因组织后代的过程。科学家把人工遗传操作动物繁殖的过程叫克降,这门生物技术叫克隆技术,含义是无性繁殖。克隆技术在现代生物学中被称为“生物放大技术”。无性生殖是指未经两性生殖细胞结合的生殖
方式
或者自然的无性生殖方式。一个克隆就是一个多...
怎样提取外周血液中的基因组DNA
答:
根据核酸分离
纯化方式
的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等试验步骤:1、贴壁细胞用胰酶消化,离心收集。2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次,离心收集。试验步骤2再重新作一边。3、加入5mlDNA提取缓冲液,(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS),混匀。4、加入25ul蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml,混匀,50℃水浴...
转化大肠杆菌之前用了
PCR纯化
,会不会有影响
答:
如果是在连接试验后,再用试剂盒纯化一次,这会对实验有很大的影响:1、纯化过程本身会有较大损失,起始量约少,相对损失就越大;2.
pcr的纯化
试剂盒往往是针对小片段(100-5k bp以内)DNA的,对于质粒,其回收效率可能进一步下降;所以,这样极有可能导致转化效率大幅下降,但如果你的连接
产物
本身较易...
酚氯仿
纯化PCR产物
的步骤是什么?谢谢
答:
混匀;(4)14 000 r/m离心15 min;(5)取上清液,加入1/10体积的3M NaAc (pH5.2)和2.5倍体积的无水乙醇,混匀,-20℃放置2 h或过夜。(6)4℃,14 000 r/m离心15 min,弃上清液;(7)沉淀用70%乙醇洗涤1次;(8)14 000 r/m离心10 min,弃上清,风干。获得
纯化
的
PCR产物
。
做基因多态性,
PCR产物
必须
纯化
后才能酶切吗
答:
你可以自己检查一下那些用来做酶切的缓冲液(A,B,C,D,E,H,Multi-Core)之间成分的差别,和酶在各个不同缓冲液的效率的差别,你就知道缓冲液用不合适会对酶切效率有多大的影响。与其浪费内切酶和时间,何必呢,你还不如
纯化
后酶切,只不过多了个步骤而已。至于
PCR产物
的保存,没有什么特殊要...
为什么
PCR产物
需经
纯化
后再与载体连接?
答:
因为
PCR
扩增出来的除了你的目的片段之后还有其它的引物,模板,还有游离的dNTP等其它的杂质。如果这些不去除的话肯定会影响你后面的连接反应,使你的连接反应受这些影响而效率不高,或者连接不上。如果是单一的PCR目的片段,那么连接效率就大大提高。
pcr产物
没有
纯化
能够直接进行双酶切吗
答:
不可以。首先,采用的是质粒模板;其次,扩增得到的非单一条带,如果不
纯化
直接酶切,那么得到的将是带有相应酶切位点的几种片段,继续试验的话,菌落PCR鉴定时可能会出现几种不同大小的条带。第三、
PCR产物
里面缓冲液并不是合适的酶切缓冲液,会极大的影响酶切的效率。甚至于根本就切不开,即便是...
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