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如何提高外源基因片段在原核细胞中的表达量
如何提高外源基因片段在原核细胞中的表达量
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推荐答案 2010-11-23
构建载体的时候,考虑用具有强启动子的载体并且能够在大肠杆菌中表达重组蛋白的载体,比如pET系列的载体,转入的宿主菌要求是表达形的,比如BL21等。在表达过程中,注意摸索诱导剂IPTG的量、诱导时间及培养温度。多次摸索就可以找到一个最佳方案,因为蛋白表达是一个载体+宿主菌+培养条件的优化组合的选取。你有可能还要考虑蛋白是否会形成包涵体,用什么样的柱子纯化。本人觉得主要是在诱导和温度培养是影响比较大,多设几组对照看哪一组表达量高。祝你好运!
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其他回答
第1个回答 2010-11-23
在外源基因前面连一个强启动子,然后转到宿主中去,这是常见的做法。本回答被提问者采纳
相似回答
如何提高外源基因片段在原核细胞中表达量
答:
在实际情况下, 在做克隆插入
片段的
时候已经把有的序列优化了 (例如选择较常见的密码子), 以两个TAA来有效终止 (基本上一个也够啦). 其他的都已经由你选择的那个载体决定了.到了蛋白表达这步, 首先选择在什么细胞系
里表达
啦.
原核细胞
(大肠杆菌吧)一般要试不同的strain (细胞系), 有的是翻译系...
外源基因在原核细胞中表达
应具备哪些条件
答:
影响外源基因高效表达的各种因素:
一、外源基因的表达效率 ①启动子的强弱。有效的转录起始是外源基因能否在宿主细胞中高效表达的关键步骤之一
,也可以说,转录起始的速率是基因表达的主要限速步骤。
增加基因
拷贝数可以
提高外源基因在
CHO
细胞中的表达量
?
答:
可行的,
增加基因拷贝数可以提高其表达量
。
影响
外源基因表达的
基因主要有哪些
答:
1. 启动子的强弱:有效的转录起始是外源基因高效表达的关键
,因此选择强且可调控的启动子至关重要。2. 核糖体结合位点的有效性:SD序列的存在对原核细胞mRNA翻译起始至关重要。3. SD序列和起始密码子AUG的间距:适当的距离有利于提高翻译效率。4.
密码子组成
:避免使用罕用密码子可以提高表达效率。5....
在基因工程制药中要想
提高外源基因在
工程菌
中的表达量
应该从哪些方面考...
答:
从以下5个方面考虑1.优化发酵条件,包括诱导时间这些因素.2.优化密码子(偏好密码子)3.换启动子4.换载体5.换宿主菌
原核
系统中影响
外源基因表达
效率的主要因素?
答:
外源基因
表达量
不足往往是得不到理想的转基因植物的重要原因。由于启动子在决定
基因表达
方面起关键作用,因此,选择合适的植物启动子和改进其活性是
增强外源基因
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