在实际情况下, 在做克隆插入片段的时候已经把有的序列优化了 (例如选择较常见的密码子), 以两个TAA来有效终止 (基本上一个也够啦). 其他的都已经由你选择的那个载体决定了.
到了蛋白表达这步, 首先选择在什么细胞系里表达啦. 原核细胞(大肠杆菌吧)一般要试不同的strain (细胞系), 有的是翻译系统经过优化的( 例如使信使RNA更稳定啦, 增加几个罕见的转运RNA来对应那些罕见的密码子啦), 有的是细胞里有辅助蛋白的 (使你要表达的蛋白能准确折叠). 转化涂板之后得到很多colony, 一定要试多个不同的克隆(colony), 因为天知道有的克隆就是表达得比另一个好. 另外还有这些变量要去优化: 诱导的时间 (细胞密度, 测OD600, 一般在0.6左右为佳), 诱导剂 (例如IPTG)的浓度, 蛋白表达的温度和时间 (经验证明,温度真是很重要!) .
希望对你有帮助~
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