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dna提取时裂解液怎么配
真菌的
DNA提取
方法有哪些,要详细操作步骤
答:
DNA提取液
:0.2M Tris-HCl(pH 7.5),0.5M NaCl,0.01M EDTA,1%SDS,3M NaAc (二)1.真菌菌丝0.5-1 g, 在液氮中迅速研磨成粉 2.加入3 mL 65℃预热的DNA提取缓冲液,快速振荡混匀65℃水浴30 min, 期间混匀2-3次 3.加入1 mL 5M KAc,冰浴20 min 4.等体积的氯仿:异戊醇(...
DNA
抽提方法与步骤
答:
因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂
提取DNA
(3).苯酚抽提法:苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆
液时
,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,...
...
提取
口腔黏膜脱落细胞中
DNA时
用到的
裂解液
是什么成分?谢谢您!_百度...
答:
您好!在
提取
口腔黏膜脱落细胞中的
DNA时
,通常使用的
裂解液
成分包括:1. 去污剂:用于破坏细胞膜的脂质双分子层,从而裂解细胞;2. 蛋白酶抑制剂:用于溶解蛋白质,保持
DNA的
完整性;3. 缓冲剂:维持适宜的pH值,以稳定裂解过程中的环境;4. 离子盐:如NaCl,调节细胞内外离子平衡;5. 表面活性剂:...
请问各位高手,提
DNA时
加的RNase
如何
配置,我用的是Sigme,R4875的,我用...
答:
楼主,你好。Sigme公司的RNase不用自己配置。根据我的经验,在
DNA提取
的过程中,在氯仿抽提那一步,加入RNase,用量在20-50μg/ml,效果还是很不错的。或者是最后用TE溶解DNA沉淀
的时候
加入也可以。欢迎一起探讨。
亲们~我要用CTAB方法
提取
食用菌的
DNA
,不知道2%的CTAB具体
怎么
配制啊...
答:
将食用菌子实体小块用液氮研磨,转入大离心管,加入65度预热的CTAB
裂解液
,温浴30分钟,期间上下颠倒离心管2-3次,后加氯仿:异戊醇(24:1)抽提3-4次,直至看不到中间白色蛋白质层为止。上清转入新离心管,加等体积异丙醇-20度沉淀
DNA
,离心,风干沉淀,用ddH2O重悬沉淀,加RNA酶消化RNA,然后加...
dna提取
过程中的关键步骤及注意事项有哪些
答:
1、
裂解液
要预热,以抑制DNase,加速蛋白变性,促进DNA溶解.2、 酚一定要碱平衡.苯酚具有高度腐蚀性,飞溅到皮肤、粘膜和眼睛会造成损伤,因此应注意防护.氯仿易燃、易爆、易挥发,具有神经毒作用,操作时应注意防护.3、 各操作步骤要轻柔,尽量减少
DNA的
人为降解.4、 取各上清时,不应贪多,以防非核酸类...
提取
大肠杆菌
DNA时
,
裂解
大肠杆菌最常采用的方法是什么?原理时什么?
答:
最常用的办法是SDS法,在反应体系中加入终浓度约为1%的SDS37度水浴1小时就可以完成大肠杆菌的
裂解
。现在手提细菌的
基因组DNA
基本上就是这个办法,具体步骤在分子克隆和精编分子生物学实验指南上都有,是最经典的方法。SDS是一种阴离子去垢剂,能够破坏细菌的细胞壁和细胞膜。
请教:细菌
DNA的提取
答:
操作最简便,对试剂条件要求低。缺点是纯度不够高,可能会含有RNA、蛋白等杂质。但是作为一般检测目的的PCR反应模板已经足够了。二、CTAB/NaCl 法 CTAB/NaCl法
提取
的
DNA
纯度较高,蛋白杂质较少,保存时间长,编者更喜欢把终浓度为20μg/ml RnaseA加在第5步温育
的时候
,这样最后没有RnaseA污染。每一步...
质粒
dna的提取时
溶液二为什么要现配现用
答:
溶液2中的主要成分是NaOH和SDS,是用来
裂解
细胞的。因为NaOH遇到二氧化碳容易反应生成碳酸氢钙,影响使用效果,因此要现配现用。SDS的话,低温容易产生沉淀。不过在37°C 水浴一下就好。主要还是NaOH的问题。希望能够帮到你~望采纳~谢谢~
用碱
裂解
法
提取
质粒
DNA的
,加入溶液1,容液2,容液3后各有哪些现象,原因是...
答:
溶液2中的主要成分是NaOH和SDS,是用来
裂解
细胞的。因为NaOH遇到二氧化碳容易反应生成碳酸氢钙,影响使用效果,因此要现配现用。SDS的话,低温容易产生沉淀。不过在37°C 水浴一下就好。主要还是NaOH的问题。溶液1主要是让菌体细胞充分悬浊于溶液,没有什么实际意义,可以不要。溶液2是碱液,目的在彻底破坏...
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