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如果你提取的质粒DNA污染有少量的染成体DNA,那么你在操作过程中哪你步最可能出现了问题?
如题所述
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推荐答案 2009-12-08
你是用试剂盒还是自己配溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ?
去除染色体DNA主要是通过其在pH12~12.5碱变性,然后复性速度比质粒DNA慢,所以能够分离的。溶液Ⅱ就是让DNA碱变性。如果你是自己溶液Ⅱ的话,就一定要现配先用,才能保证pH范围控制在12~12.5间。
又或者由于加入溶液Ⅲ后体系就会立即形成一层沉淀,如果没有立即摇匀,就会使溶液接触不充分以至不能充分去除染色体DNA。
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其他回答
第1个回答 2009-12-08
是分离那步吧、不确定
第2个回答 2009-12-07
染色体dna吧
应该是裂解的那一步
相似回答
如果提取的质粒DNA污染有少量
染色体
DNA,
你们
在操作过程中哪
既不最可 ...
答:
会把夹在沉淀中的基因组DNA也一起吸入硅胶吸附柱
,这一步的可能性更大,通常都是这一步混入的基因组DNA。.
质粒提取的
问题
答:
1.7多说明
有少量污染,
不知道你的用途是什么
,如果
用于细胞转染还是纯度高一点的好。纯的
DNA
样品比值为1.8,纯的RNA样品比值为2.0。核酸样品中若含有蛋白质或苯酚等杂质,此比值则显著降低。
在细菌染色体
dna提取过程中
怎么样除去
质粒dna
?
答:
②凝胶电泳
,分离开两种DNA后,将迁移最慢的条带(染色体DNA)剪下,用洗脱液洗脱下来.③碱变性裂解法,细菌悬浮液在高碱性条件下,染色体和蛋白质变性,质粒DNA由于其超螺旋共价闭合结构,双链不会分离,再以PH4.8的高盐缓冲液调节其PH至中性,质粒DNA可再度复性,其速度比染色体DNA复性快,重新溶于溶液,而...
质粒DNA的
小量制备 注意哪些
操作
为什么
答:
质粒DNA的小量制备的步骤:细菌的收获:将1.5ml菌液倒入微量离心管中,12000g离心30秒,吸去培养液
。上清要务必吸取干净,否则会影响质粒的质量。必要时可以离心2次。将细菌沉淀重悬于150μl用冰预冷的溶液I中,加入1/50体积RNAseA贮存液,剧烈振荡,使之完全分散。 溶液I:50mmol/L葡萄糖,25mmol...
在
质粒DNA的提取过程中,
应注意哪些
操作,
为什么?
答:
碱法抽提得到质粒样品中不含线性
DNA,
不信的话你用EcoRI来线性化质粒后再进行琼脂糖电泳,就会看到线性
质粒DNA
的位置与这三条带的位置不一样。其实这三条带以电泳速度的快慢而排序,分别是超螺旋、开环和复制中间体(即没有复制完全的两个质粒连在了一起)。
如果你
不小心在溶液II加入后过度振荡,会有第四条带,这...
质粒污染的
原因有哪些?
答:
5. 环境污染:实验室所处的环境也可能成为
质粒污染的
来源。例如,空气中的微生物、实验室内的灰尘等都可能携带有
质粒DNA,
从而污染实验样品。6. 人为因素:实验人员
的操作
失误、疏忽等也是导致质粒污染的原因之一。例如,
在提取
、纯化质粒
的过程中
,
如果操作
人员没有按照规定的程序进行
操作,可能
会导致质粒...
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