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简述质粒dna提取的步骤
请问:怎样
提取
微生物的
质粒
(
DNA
)?
答:
4.加200μl新鲜配制的溶液Ⅱ,颠倒数次混匀(不要剧烈振荡),并将离心管放置于冰上2-3min,使细胞膜裂解(溶液Ⅱ为裂解液,故离心管中菌液逐渐变清).5.加入150μl预冷的溶液Ⅲ,将管温和颠倒数次混匀,见白色絮状沉淀,可在冰上放置3-5min.溶液Ⅲ为中和溶液,此时
质粒DNA
复性,染色体和蛋白质不可...
质粒提取步骤
及原理
答:
1、首先,将培养好的细菌离心,收集沉淀。将沉淀加入裂解缓冲液中,使细菌细胞壁破裂,释放出质粒DNA
。2、其次,加入蛋白酶K等蛋白酶,消化蛋白质,与质粒DNA分离开。加入乙醇或异丙醇等沉淀剂,使质粒DNA沉淀。用百分之70乙醇洗涤沉淀,去除残留的盐分和杂质,离心干燥。3、最后,将干燥的质粒DNA加入适...
质粒提取的
主要
步骤
是什么及其作用
答:
从细菌中分离质粒DNA的方法都包括3个基本步骤:培养细菌使质粒扩增;收集和裂解细胞;分离和纯化质粒DNA
。采用强碱液、加热或溶菌酶(主要针对革兰氏阳性细菌)可以破坏菌体细胞壁,十二烷基磺酸钠(SDS)和TritonX-100(一般很少使用)可使细胞膜裂解。经溶菌酶和SDS或Triton X-100处理后,细菌染色体DNA会...
质粒DNA的提取
和纯化实验
步骤
是什么?
答:
DNA
在pH5~9的溶液中是稳定的,但当pH>12或pH<3时,就会引起DNA双链之间氢键的解离而变性。溶液Ⅱ中NaOH浓度为0.2mob/L,加入溶液Ⅱ后,该系统的pH为12.0~12.6,因而促使染色体DNA与
质粒的
变性解离成单链。SDS是一种阴离子去垢剂,它的主要作用有:①溶解细胞膜上的脂肪与蛋白,因而溶解膜...
质粒提取的步骤
答:
1.挑取琼脂培养皿上的单个菌落,移至3-10mlLB培养液中,37℃150rpm培养过夜
。2.取1.5ml培养液移至Eppendorf管内,12000rpm离心1分钟,弃上清液。3.将细菌沉淀悬浮于100μl溶液(GTE溶液)中,强烈振荡使之充分混匀。4.加入200μl新鲜配置的溶液(NaOH/SDS溶液),盖严管盖轻轻颠倒离心管数次以混合...
提
质粒步骤
答:
质粒提取
主要包括三个
步骤
:1、菌体扩繁。2、菌体裂解释放
质粒DNA
。3、质粒DNA的分离与纯化。质粒提取办法中,最常用的是碱裂解法,它具有得率高,适用面广,快速,纯度高等特色。其原理是:强碱(pH12.0-12.6)环境下,SDS损坏细胞壁并裂解细胞,一同使宿主细胞的蛋白质、染色体及DNA发生变性,而...
质粒DNA的提取
方法总共有哪些,回答的全给高分???
答:
预计扩增产物片断大小为714 bp. ④ 常规制备感受态菌E.coli DH5a,
提取质粒DNA
常规转化感受态,涂于含有卡那霉素(30 μ/mL)LB培养平板中,37℃培养,15 h后观察筛选克隆情况.碱解法 操作
步骤
1、细菌繁殖 LB培养基,2 ml/20ml,37℃,200rpm,摇一摇,过夜 2、离心10 min,5000 rpm, 4℃;弃...
质粒
如何
提取
答:
1.质粒转化 具体操作
步骤
:将1ul
质粒DNA
加入1.5ml的离心管;将感受态细菌(competent cells)从-70℃冰柜中取出,快速吸取50ul感受态细菌,加入含质粒DNA的1.5ml的离心管;轻轻地旋转以混匀内容物,在冰中放置30~60 min;42度热休克90s(该时间应该非常准确,用...
质粒DNA
的粗
提取过程
答:
p2:此步为碱处理。其中NaOH主要是为了溶解细胞,释放
DNA
,因为在强碱性的情况下,细胞膜发生了从双层膜结构向微囊结构的变化。SDS与NaOH联用,其目的是为了增强NaOH的强碱性,同时SDS作为阴离子表面活性剂破坏脂双层膜。p3:溶液III的作用是沉淀蛋白和中和反应。其中醋酸钾是为了使钾离子置换SDS中的钠...
基因工程实验Ⅱ大肠杆菌
质粒DNA
的抽提及检测『Protocol』
答:
加入500ul溶液W,12000rpm离心1min,弃滤液 (重复此
步骤
一次,洗掉多余盐离子及乙醇)↓ 12000rpm离心3min (彻底去除纯化柱中残留的液体)↓ 将DNA纯化柱置于新的离心管中,向纯化柱中央处悬空滴加80ul溶液Eluent,室温静置2min (将硅胶吸附柱上的
质粒DNA
洗脱下来)↓ 12000rpm离心1min (管底即为...
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