使用Oligotex mRNA Kits (QIAGEN)进行mRNA的分离，首先准备工作如下：
将Oligotex Suspension在37℃水浴中溶解并混匀，室温保存。
OBB Buffer同样在37℃水浴中溶解并重溶沉淀，室温备用。
OEB Buffer则置于70℃待用。
试验步骤分为以下几步：
取Total RNA，不超过1mg，用移液器取适量到1.5ml离心管中，加RNase-free水至500ul。
根据表3加入相应体积的OBB Buffer和Oligotex Suspension，轻轻混匀后，于70℃水浴中3分钟，室温静置10分钟。
离心13000rpm，2分钟，移除上清，保留至polyA结合。
沉淀物用400ul OW2 Buffer混匀，转移到Spin Column中，RT条件下离心1分钟。
重复此过程，分别加入400ul OW2和OER Buffer(70℃)，离心1分钟。
测OD值，并通过电泳定量。
对于磁珠法分离，步骤如下：
在RNase-free管中加入0.1~1.0mg总RNA，加RNase-free水至500ul，65℃加热10分钟。
加入标记的Oligo(dT)和20×SSC，室温放置10分钟。
配置0.5×SSC和0.1×SSC，将磁珠SA-PMPs分散，进行磁性分离，清洗磁珠3次。
将混合物加入磁珠，轻轻摇匀，磁性分离后洗涤，收集mRNA。
通过0.1×SSC洗涤，再用RNase-free水分散磁珠，洗脱mRNA。
磁珠悬浮于RNase-free水中，重复操作，收集mRNA并可能进行浓度浓缩。
在操作过程中，务必严格遵守手套和口罩的使用，根据RNA质量和杂质情况，选择Oligotex或磁珠方法。mRNA的电泳图会呈现smear特征。
扩展资料以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。