过柱子的原理与方法

如题所述

原理:是纯化的基本手段之一。柱层析,利用硅胶把产物和杂质都吸附上去,利用不同的流动相去淋洗,因为每种物质在固定相的结合力不同,有的吸得牢固一点就洗下来慢一点有的吸得不牢固,很快就洗下了,这样就起到区分的目的。

方法:

    称量,200-300目硅胶,称30-70倍于上量。

    搅成匀浆,假如干硅胶体积以北的溶剂用玻璃棒充分搅拌。

    装柱,将柱底用棉花塞紧,加入约三分之一体积石油醚,装上蓄液球,打开柱下活塞,将匀浆一次倾入蓄液球内,随着沉降用石油醚将沾在蓄液球内的硅胶冲入柱中;

    压实,加入石油醚,用双联球或气泵加压,直至流速恒定;

    上样,加入洗脱剂,将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面;

    过柱和收集,用梯度洗涤

    检测,使用专用喷显剂检测;

    送谱,收集的产品旋干,在松谱前重结晶

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