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我用BL21(DE3)菌株表达一外源基因,用IPTG诱导,为什么我不加IPTG的对照组也会有目的蛋白的表达呢?
如题所述
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推荐答案 2011-08-08
有两种可能,一种是大肠杆菌里本身有这么大小的蛋白,不过这个可能性太小。另外一个是叫做本底表达,就是你导入后目的蛋白在未诱导情况下也会表达,这可能是大肠杆菌产生了类似IPTG的物质,这个在原核表达中是很常见的,如果本底表达量不大的话对实验结果没什么影响的。
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不
用IPTG诱导的
重组蛋白能在
BL21
中
表达
吗,如果表达经SDS-PAGE电泳后能...
答:
不
用IPTG
当然可以
表达,
当然也可以在SDS-PAGE上看到。但是菌里有那么多蛋白,你不通过诱导你怎么知道哪个是你要的蛋白,难道仅凭marker吗?你必须通过
IPTG诱导,
然后用
不加IPTG的
做为
对照,
你才知道哪个是你要的蛋白,到底表没表达。希望可以帮到你,如需帮助请和我联系 ...
用IPTG诱导表达的
时间是否越长越好
,为什么
?
答:
用IPTG诱导表达
的时间不是越长越好,因为只有在特定的环境信号(加入IPTG)刺激下,目的基因才会被激活,之后才会产生大量的代谢表达产物,收集有较多表达量的菌体。如果不用
IPTG的
话,大部分目的蛋白是不会
表达的,
有少部分可能会有极少量的
表达,
称之为泄漏表达。科学研究:IPTG常用于需要诱导β-半乳糖...
不
用iptg诱导,
蛋白会
表达
吗
答:
不加IPTG也会有
少量
表达,
即leaking
BL21
中的
表达
载体
为什么
要
用IPTG诱导
答:
BL21
细胞
基因组
中的T7 promoter可以被
IPTG诱导,
诱导后其promoter下游基因产物T7 RNA polymerase表达增多,T7 RNA polymerase又可以将转入BL21细胞中的质粒目的基因转录成mRNA,进而表达为蛋白质。因此
,IPTG
诱导可以使BL21细胞表达更多目的蛋白。
IPTG诱导表达
后的蛋白上样问题
答:
IPTG诱导
后一般为胞内表达。1.检验蛋白的表达:取微量菌液,离心收获菌体,然后用PBS 之类重悬,洗涤菌体若干次,加入与菌液等量的PBS,取菌悬液与上样buffer混合,100度3min,取上清上样。对照为未
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表达
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答:
4 表达载体和重组载体都分别设置诱导组与不
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