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求助QIAGEN试剂盒提取总RNA的步骤
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第1个回答 2017-03-12
物材料用最精确的方法,注意材料要保持冷冻状态加入450μ,加入液氮进行研磨将研磨得到的粉末,快速转移至无RNase,称取不超过100mg的植物材料;L Buffer RLT(1mL 加入10μL β-巯基乙醇),置于处理过的研钵,并经过液氮冷却的2mL离心管(自备)
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将研磨得到的粉末,快速转移至无RNase,并经过液氮冷却的2mL离心管(自备),注意材料要保持冷冻状态 加入450?L Buffer RLT(1mL 加入10μL β-巯基乙醇),颠倒混匀,涡旋 将溶解物转移至于淡紫色的QIAshredder spin column,最大转速离心2分钟,取上清转移至新的2mL的收集管(自备)加0.5倍体积(约225μL...
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植物材料 用最精确的方法,称取不超过100mg的植物材料,置于处理过的研钵,加入液氮进行研磨 将研磨得到的粉末,快速转移至无RNase,并经过液氮冷却的2mL离心管(自备),注意材料要保持冷冻状态 加入450µL Buffer RLT(1mL 加入10μL β-巯基乙醇),颠倒混匀,涡旋 将溶解物转移至于淡紫色的QIAs...
培养细胞如何
提取
mRNA,如何逆转录?
答:
1)、取上述
提取的总RNA
若干(少于0.25 mg)到一个新的无RNase 的EP管中,用无RNase的水定容到250 ul。2)、加入Buffer OBB 250 ul,Oligotex Suspension 15 ul。用Tip打匀或用手弹匀。3)、70℃水浴,3分钟(裂解
RNA的
二级结构)。4)、20-30℃条件下,静置10分钟(让Oligotex与mRNA结合)。...
如何根据
总RNA
量选择OBB Buffer和Oligotex Suspension的加入量?
答:
对于磁珠法分离,
步骤
如下:在RNase-free管中加入0.1~1.0mg
总RNA
,加RNase-free水至500ul,65℃加热10分钟。加入标记的Oligo(dT)和20×SSC,室温放置10分钟。配置0.5×SSC和0.1×SSC,将磁珠SA-PMPs分散,进行磁性分离,清洗磁珠3次。将混合物加入磁珠,轻轻摇匀,磁性分离后洗涤,收集mRNA。通...
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总rna提取
试剂盒
用的是天根的 完全按操作进行 3次全失败 求帮助...
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6.抽提结束后如何判断失败?电泳?浓度测定?如果只是通过电泳判断的,需要确认电泳的设备也擦拭干净了,而且尽量缩短电泳的时间,避免在电泳
过程
中降解。7.其实我们以前用
QIAGEN的
盒子提细菌的,没觉得有这么夸张。所以可以先看看
试剂盒
后面是不是列有Troubelshooting的表,参照这个确认有可能的问题,如果还是...
RNA的提取
方法
步骤
及原理.
答:
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一种
总RNA
抽提
试剂
,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞,抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行
提取
组织或细胞中的RNA。Trizol作用原理:在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持
RNA的
完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后,裂解液分层成...
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