pcr原始曲线和扩增曲线区别

Question

如题所述

Answer 1

扩增曲线可以粗略地判断扩增效率。SYBR Green的双delta Ct法要求目的基因和内参的扩增效率基本一致。如果不一致，需要对公式进行修正，部分qPCR仪的配套软件可以做到，直接输入每对引物的扩增效率。但无论如何，保证高扩增效率是实验成功的关键。

如果扩增效率一致，不同Ct的曲线显示出来就基本是平行的位移，其倾斜程度基本一致。而如下图一样，一条比较“陡”，另一条比较“平”，那么意味着扩增效率不一致。有可能是引物效率不一，或者个别样品、反应孔存在抑制PCR的污染等。

溶解曲线分析

可以用来确定不同的反应产物，包括非特异性产物。扩增反应完成后，通过逐渐增加温度同时监测每一步的荧光信号来产生溶解曲线，随着反应中双链DNA变性，荧光染料又回复到游离状态导致荧光信号降低，用荧光信号改变的负的一次导数与温度作图，在扩增产物的溶解温度上有一特征峰，用这个特征峰就可以将特异产物与其它产物如引物二聚体区分开，因为它们在不同的温度溶解。