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pcr扩增曲线的方程
做荧光定量
PCR
时,它的计算公式是什么?
答:
Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX0+lgN/lg(1+Ex)
。n为扩增反应的循环次数,X0为初始模板量,Ex为扩增效率,N为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。起始拷贝数越多,Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,其中横坐标代表起始拷贝数的对数,纵坐标代Ct值。因此,只要获得未知样品的Ct值...
PCR扩增
效率的评估
答:
q
PCR扩增
效率主要是通过标准
曲线的
线性关系
方程
Cq=-klgX0+b来判断,扩增效率E在90%-110%之间时,认为扩增接近理想情况;参数R2要求≥0.98,R2越接近1,则说明Cq和X0的Log值之间的相关性越高。那么扩增效率E表现不好,主要分为两种情况:1)过低的扩增效率(<90%)可能存在的原因:☑ 移...
定量
PCR
方法及数据分析
答:
PCR扩增理论方程:起点定量与终点定量:起点的DNA量为“天然”的含量
,更有意义;终点的DNA量为经过PCR过程“加工”的量,存在部分“失真”。(终点定量存在更大的误差)定量PCR:通过实时监测PCR每一个循环扩增产物相对应的荧光信号,来实现对起始模板进行定量或者定性的分析化学原理:荧光染料嵌合法,探针...
q
PCR扩增曲线的
自述
答:
我是
扩增曲线
,来自荧光定量
PCR
,是用于描述qPCR动态进程的曲线,我有两种形态,一种是线性图谱:横坐标是循环数,纵坐标是荧光强度值;另一种是对数图谱:横坐标是循环数,纵坐标是荧光强度值的对数。大家根据我来确定Cq值,最终确定初始模板的含量。新冠疫情以来,我可是发挥了重要的作用,诊断技术的金...
如何作QPCR的标准
曲线
答:
PCR
-ELISA法:利用地高辛或生物素等标记引物,
扩增
产物被固相板上特异的探针所结合;再加入抗地高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,最终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,加入内标,作出标准
曲线
,也可实现定量检测目的。通过测定一系列已知组分的标准物质的某理化性质,从而得到该...
实时荧光定量RT-
PCR的
Fold change怎么计算
答:
3.1绝对定量从标准
曲线
获得线性
方程
:Y=-3.432X+34.638;R2=0.995,E=95%,所以可以进行数据分析。如果未知样品的Ct=25,代入方程:25=-3.432X+34.638,所以:X=2.8Copies=10^2.83.22-DDCt定量2-DDCt方法使用的前提是内参和目的基因的
扩增
效率接近100%,且相差不超过5%。所用公式如下:2-...
pcr
原始曲线和
扩增曲线
区别
答:
PCR
理论的标准
曲线
应该是2的N次方。如图蓝线,但实际上,因为酶活力,dNTP,引物等的消耗,达不到理论的值,而是S曲线
pcr
原始曲线和
扩增曲线
区别
答:
扩增曲线
可以粗略地判断扩增效率。SYBR Green的双delta Ct法要求目的基因和内参的扩增效率基本一致。如果不一致,需要对公式进行修正,部分qPCR仪的配套软件可以做到,直接输入每对引物的扩增效率。但无论如何,保证高扩增效率是实验成功的关键。如果扩增效率一致,不同Ct的曲线显示出来就基本是平行的位移,其...
怎么通过Q-
PCR的扩增曲线
和溶解曲线来分析结果,如何通过曲线来判断结果...
答:
1、
扩增曲线
(如果做双ΔCT法):(1)扩增曲线必须是S型,有明显的四个时期,且复孔的CT值尽量一致,相差不要超过0.5个CT值(上限是1个CT值);(2)同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增,其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。当然这是理论值;另外阴性对照不能有扩增(40个循环以后出CT...
跑荧光定量没有结束前可以提前在电脑上面看结果吗?
答:
绘制标准曲线 测定质粒的浓度,依据公式计算出质粒的拷贝数。对质粒进行系列稀释,分别作为模板进行荧光定量
PCR
并记录Ct 值。最后依据起始拷贝数的对数及 Ct 值绘制标准曲线,得到标准
方程
。当需要对起始模板进行定量时,只需要得到
扩增曲线
,读得 Ct 值,带入标准方程即可对起始模板定量。荧光标记方法 ...
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