感受态细胞的制备时的注意事项:
1、培养温度。较低的温度培养有利于感受态的形成,这样可以获得较高的感受态,但太低又不实用,因而产生了 Inoue 的高效感受态制备方法,它实际是利用了所有有利于感受态的文献而得出的一
个非常理想方法。
2、在保存感受态时,DMSO 要比甘油的效果要好,它会使感受态的效率增加。
3、液氮速冻也会使感受态的效率提高,因此推荐用液氮速冻感受态,然后保存于超低温冰箱内。
4、冻存的感受态用一次拿一管,不要反复冻融。化冻之后立即使用,不要冰上放太久。
5、操作时可以轻弹轻甩,尽量避免用移液器吹吸。
扩展资料:
感受态细胞(competent cell):理化方法诱导细胞,使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。
主要原理就是通过处理使细胞的通透性变大,直观的说,使得细胞膜表面出现一些孔洞,便于外源基因或载体进入感受态细胞。由于细胞膜的流动性,这种孔洞会被细胞自身所修复。
将构建好的载体转入感受态细胞进行表达,不仅可以检验重组载体是否构建成功,最主要的是感受态细胞作为重组载体的宿主可以进行后续实验,如蛋白质表达纯化等工作。
参考资料来源:百度百科--感受态细胞