克隆载体不是不能够表达外源基因吗 没有sd序列,但是为什么它能够表达自身的标记基因呢??

有的克隆载体有T7启动子,复制子等,但是没有核糖体结合位点,所以说不能表达外源基因,可是为什么它能表达标记基因呢,如抗抗生素基因

克隆载体中会带有所需表达的蛋白的原件,例如乳糖操纵子等。目前很多克隆载体里面都是利用蓝白斑筛选来判断外源片段是否插入。例如T载体。外源片段通过插入到lacZ基因中,破坏了lacZ,最后lacZ无法表达,证明有外源序列插入。之前的原件肯定是需要能保证lacZ基因表达的。只是这种表达通常都是由诱导型启动子控制的,所以如果只是克隆,不进行诱导,外源基因也不会表达的。而载体上的抗性基因,应该是有一些组成型的启动子调控。
下面有关于克隆载体和表达载体的比较,可以参考一下。我们实验室以前为了能够检测到酶活,都是用pUC19来做表达的,因为pET系列有时候表达量太大了,会造成包涵体,反而检测不到活性变化。所以就是用的克隆载体来做表达的。

克隆载体:大多是高拷贝的载体,一般是原核细菌,将需要克隆的基因与克隆载体的质粒相连接,再导入原核细菌内,质粒会在原核细菌内大量复制,形成大量的基因克隆,被克隆的基因不一定会表达,但一定被大量复制。
表达载体就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等),是目的基因能够表达的载体。
克隆载体目的在于复制足够多的目标质粒,所以常带有较强的自我复制元件,如复制起始位点等,往往在菌体内存在多拷贝,所以抽质粒会抽出一大堆。但不具备表达元件。而表达质粒有复杂的构成,为的是控制目标蛋白的表达,如各种启动子(T7),调节子(LacZ)等,而且以pET为代表的表达载体在菌体内都是低拷贝的,防止渗漏表达。
是否含有表达系统元件,即启动子--核糖体结合位点--克隆位点--转录终止信号,这是用来区别克隆载体和表达载体的标志。追问

您好,我还想再请教一下,您知不知道建库用表达载体能用什么载体呢??

追答

很少有人专门用表达载体来建库的,因为建库的目标是尽可能多的插入片段,获得更多的插入子,以获取最大的库容量。而如果是能够满足大量表达的载体,通常拷贝数都不高,这样一来,库容量太小,建库就失去了意义。
如果是你要找的那段基因序列功能比较明显,用pUC18或者pBluescript也没问题,筛库的时候,稍微加点IPTG,能少量表达。
我自己是没有用过表达载体去建库的。

追问

请问我之前看了很多p-bulescript资料 这个载体好像没有RBS区 那是不是就不能表达啊 唉 麻烦您了

参考资料:http://ask.bbioo.com/ask/show-11564.html

温馨提示:答案为网友推荐,仅供参考
第1个回答  2012-08-29
核糖体是结合在RNA上的,既然有些载体含有启动子,就可以将标记基因转录,实现标记基因的表达
相似回答