如何纯化pcr产物或粗提的dna

Question

如题所述

Answer 1

DNA纯化的步骤是：

1.2-25倍100%的酒精冰箱中先预冷，降温后再加入DNA中；

2.低温，冰中反应5min至更长时间；

3.低温，离心；

4.加70%乙醇清洗两遍；

5.加TE溶解DNA.

Answer 2

(1) 在PCR反应液中加入3倍体积的Buffer PCR-A，若需加入的Buffer PCR-A不足100μl，则加入100μl。
(2) 将DNA-prep Tube置于2-ml Microfuge Tube中，将步骤⑴中的混合液移入DNA-prep Tube中，5500rpm离心1min。
(3) 弃滤液，将DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube中，加入500μl Buffer W1，5500rpm离心1min。
(4) 弃滤液，将DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube 中，加入700μl 已加无水乙醇的Buffer W2，5500rpm离心1min，以同样的方法再用700μl已加无水乙醇的BufferW2洗涤一次。
(5) 弃滤液，将DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube中，14000rpm离心1min。
(6) 连滤液一并弃掉收集管，将DNA-prep Tube 置于一新的1.5ml 离心管中，在silica 膜中央加入25-30μl Eluent或去离子水（65℃预热）。
(7) 室温静置2min，14000rpm离心1min洗脱DNA。
(8) 取5μl样品，1%琼脂糖凝胶电泳检测纯化结果。

Answer 3

你是指跑胶、割胶然后用试剂盒纯化回收吗?
如果是的话,有以下几个方法可能可以提高回收率.
1凝胶要充分溶解.2加elution buffer溶解DNA时少加点.3用elution buffer洗脱时可以把管子里的溶液吸回来,重复一次.4溶解时延长室温溶解时间.5PCR循环可以多几次.6可以把两管回收离心后,合并成一管吸附柱回收.本回答被提问者和网友采纳