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蛋白纯化填料是什么
蛋白质
分离提纯方法
答:
1、盐析法:盐析法的根据是
蛋白质
在稀盐溶液中,溶解度会随盐浓度的增高而上升,但当盐浓度增高到一定数值时,使水活度降低,进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和,水化膜逐渐被破坏,最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。2、有机溶剂沉淀法:有机溶剂能降低蛋白质溶解度的原因有二:其一、...
mbp标签 洗不下来
答:
mbp标签 洗不下来要用麦芽糖洗脱了。MBP标签的融合
蛋白纯化
原理,麦芽糖结合蛋白与亲和
填料
结合了,当存在高浓度的麦芽糖的时候,麦芽糖会和麦芽糖结合蛋白相互竞争亲和填料,麦芽糖结合蛋白肯定竞争不过,就被洗脱下来了。麦芽糖结合蛋白(MBP)是大肠杆菌麦芽糖转运系统的成员之一,主要负责麦芽糖的摄取及分解...
我也是做
蛋白纯化
的,有种蛋白第一次纯化时,也是非常杂,你之前又遇到过...
答:
一般可溶性表达都会遇同类问题,个人觉得有如下方面可以考虑:仔细研究
填料
的说明书,同样是His-tag或GST标签的填料,但不同厂家,或者不同分辨率,其缓冲液和洗脱浓度都是有差异的,务必注意!比如,在选择填料时,可选择颗粒稍微细些的填料,分辨率会更好些。在样品的各阶段都要控制杂
蛋白
,以最常见的...
原核表达常见问题(三)
蛋白纯化
后续的问题分析
答:
5.
填料
有问题,换填料。6. 最后可以考虑一下试剂的问题。1. 更换缓冲液,可能 pH 与蛋白质 pI 较接近。2. 填料选择不对,与蛋白结合力太弱,更换适合改
纯化蛋白质
的填料。3. 直接收取目的蛋白,再用其他纯化方法进一步纯化。1. pH 发生变化,导致蛋白质沉淀。找准蛋白质的一个等电点,溶液环境...
蛋白质
的
纯化
方法有那些呢?具体步骤
是什么
?
答:
选择合适的有机溶剂浓度。(四)样品的进一步分离
纯化
用等电点沉淀法、盐析法所得到的
蛋白质
一般含有其他蛋白质杂质,须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。常用的纯化方法有:凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。
柱层析原理及影响因素
答:
柱层析总的原理,就是让目标蛋白结合在层析
填料
(树脂)上,然后通过特定的缓冲液将其洗脱下来,以达到
纯化
的效果。具体几种分类稍微归纳了下给你参考 免疫亲和层析 原理:亲和色谱分离蛋白以一个蛋白与特异性配基配对到色谱基质上,且
蛋白质
与配基间具有可逆的相互作用作为基础。目标蛋白与配基之间的生物学...
什么
是透析法
纯化蛋白
答:
其膜孔大小与硫酸浓度、浸泡时间以及用水冲洗速度有关;火棉胶膜系将火棉胶溶于乙醚及无水乙醇,涂在板上,干后放置水中即可供用,其膜孔大小与溶剂种类、溶剂挥发速度有关,溶剂中加入适量水可使膜孔增大,加入少量醋酸可使膜孔缩小;
蛋白质
胶(明胶)膜可用20%明胶涂于细布上,阴干后放水中,再...
蛋白纯化
过程中,lysis buffer,wash buffer和Elution buffer所含的咪唑的...
答:
使那些与
填料
亲和力弱的杂
蛋白
不能挂柱;wash buffer中加咪唑是为了洗去大部分已挂柱的杂蛋白(也会洗去少量目的蛋白);elution buffer中加梯度咪唑,而且咪唑浓度渐高,是咪唑和目的蛋白竞争性结合填料,从而把目的蛋白从柱上洗脱。这是我的理解,欢迎继续讨论,祝愉快!
蛋白纯化
的原理
是什么
?
答:
每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异,利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段二个阶段。一般
蛋白纯化
采用的方法为树脂法。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如DNA、RNA等分开,由于此时样本...
气体
纯化
器中的
填料
都有
什么
答:
首先我们要知道气体
纯化
器的功能
是什么
:是将所需使用的气体内的杂质去除,将该气体纯度提升至99.99999%以上,例如高纯的氮气,氢气,氧气,氩气在工业生产中起到至关重要的作用。接下来我们就知道了气体纯化器中的
填料
(净化材料)的作用了,是针对性的去除杂质。中鼎化学是这样做的:催化剂:可以催化H2...
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