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提rna用细胞沉淀吗
细胞提取RNA
时加入裂解液可以冻起来过夜吗?
答:
不建议,没干过。有条件的话可以加
RNA
酶抑制剂冻在-20℃。
如何检测一个
细胞
中的蛋白质表达量
答:
实时荧光定量PCR检测mRNA的表达,然后westernblot检测蛋白表达量.首先你确定拿到了这两种
细胞
系,通过PCR反应证明一个是野生型一个是突变型,即snp。然后用试剂盒
提取RNA
,设计引物,采用半定量或绝对定量的方法,测定mRNA表达水平;然后另取细胞裂解,提取总蛋白,用特异性抗体检测蛋白表达量。
提rna
一定要处于对数生长期吗
答:
判断
细胞
是否处于对数生长期的方法:细胞汇合度达到70%-80%时基本上是出于对数期,在显微镜下一观察就可以 。做生长曲线一作图。细胞计数,养上几个孔的细胞,每隔1-2天消化一个孔的细胞下来用台盼蓝染色血球计数板计数。如果是简单的判断一下,要搞清楚细胞生长的不同时期,刚开始细胞生长一般是悬浮...
跪谢先,我要收集骨髓液,分离单核
细胞提取
DNA和
RNA
。应该怎样保存骨髓液...
答:
一般生物样品都是放在-80冰箱保存,不过如果是蛋白的话,-80冰箱保存两个月也会降解!
RNA
时间久更短了。融化时,打一盒冰 ,样品放在冰上溶解。运输条件一般有两种,一种是放冰袋到泡沫盒中,另一种就是放干冰到泡沫盒中,
用于
RNA提取
的异硫氰酸胍可以灭菌吗
答:
RNA极易变性,你那样不可能提到,顶多是DNA.
提取RNA
需要加入极强的蛋白质变性剂,比如:异硫氰酸胍!目前提取RNA的方法:用酸性胍盐/苯酚/氯仿抽提!注意事项:提取用的玻璃器皿要经过高温焙烧,塑料用具经过高压灭菌,不能灭菌的用0.1%的焦炭酸二乙酯处理,再煮沸以除净焦炭酸二乙酯;在破碎
细胞细胞
的...
用TRizol试剂提悬浮
细胞
的
RNA
,操作都是按照说明进行的,电泳检测只有一...
答:
被污染了吧~
RNA提取
超容易被污染的。确定试剂没问题~严格把关所有的器材消毒灭菌,换一个地方做一做试试看~有时候整个房间可能都会被污染的。
为什么
提取
质粒时加入异丙醇出现了白色絮状
沉淀
?
答:
异丙醇与蛋白质反应,使其
沉淀
。分析如下。采用强碱液、加热或溶菌酶(主要针对革兰氏阳性细菌)可以破坏菌体
细胞
壁,十二烷基磺酸钠(SDS)和TritonX-100(一般很少使用)可使细胞膜裂解。经溶菌酶和SDS或Triton X-100处理后,细菌染色体DNA会缠绕附着在细胞碎片上,同时由于细菌染色体DNA比质粒大得多,易受机械力和核酸酶等...
做实验
提取RNA
,RNA裂解液溅到皮肤上,特别疼,烧了一个洞,不知道这个会不...
答:
主要成分大概是蛋白酶之类的,不是变性剂之类的。所以才会产生皮肤疼痛的感觉,但不会有大的伤害。再者,皮肤是很厚实的,想进入皮肤很难很难。
细胞
活力过低对
RNA提取
有影响吗
答:
RNA
聚合酶是没有3'--5'外切酶活性,也就是校正活性,但是你要知道RNA并不是在转录过程中校正的,而是在转录结束后有RNA编辑和tRNA的反密码子摆动性共同起到校正作用。此外,还有1型、2型内含子的自剪接作用和gRNA的指导作用(如Apo100和Apo48蛋白的表达),可以把不转录的RNA部分剪切掉,使这一部分...
铺了明胶后培养皿上的
细胞
可以直接用trizol
提取RNA吗
?还是要用胰酶消化...
答:
得用胰酶消化,要不不纯,
提取
不出来
RNA
.
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