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提rna用细胞沉淀吗
求TRIZOL
提取RNA
的详细步骤
答:
厚百提供:1、在提取组织RNA时,每50~100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解;
提取细胞RNA
时,先离心
沉淀细胞
,每5-10 ╳106个细胞加1ml Trizol后,反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞。2、将组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置5分钟;在EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.2ml...
实验1:总
RNA
的
提取
——Trizol
答:
RNA是核酸,具有较好的水溶性。
提取RNA首先破碎细胞,然后用提取液将RNA溶出,反复抽提去除蛋白质,加入乙醇沉淀RNA,将RNA沉淀溶解备用
。常用的试剂为Trizol,该试剂可以破坏细胞使RNA释放出来的同时,同时使RNA酶变性失活,保护RNA的完整性。Trizol的主要成分为异硫氰酸胍、酚和B-巯基乙醇,异硫氰酸胍属于解...
m
RNA提取
注意事项
答:
RNA的提取其实原理很简单:通过变性剂破碎细胞或者组织,然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA,再经过沉淀
,洗涤,晾干,最后溶解。但是由于RNA酶无处不在,随时可能将RNA降解,所以实验中有很多地方需要注意,稍有疏忽就会前功尽弃。1.1 分离高质量RNA 成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA至少应保证...
细胞提取RNA
求助
答:
2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中,把水相转移到新管中,
不要吸到沉淀
。吸附柱前处理:在吸附柱中加入500ul 洗柱液,室温放置2分钟,2-8℃ 12,000 rpm离心2min,弃废液。6. 第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀,加入吸附柱静置2分钟,2-8℃ 12000rpm离心2min,弃...
如何从冻存的
细胞提取RNA
十万火
答:
2). 不待
细胞
溶解,将Trizol500ul-1ml直接放入冻存管中,此时Trizol会冻成冰状;3). 将冻存管缓慢融化,并用加样器吹打混匀;4). 将细胞裂解液移至Eppendorf管中,16000′g离心1min,吸出管底絮状
沉淀
;注释:该步骤并非必要,多数Protocol省略该步骤,但加入该步中能明显提高
RNA
的质量;注意不能...
RNA
的
提取
方法
答:
4、异丙醇
沉淀
法:基本同1法,仅用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子
RNA
(在异丙醇中可溶状态)5、表面活性剂快速制备法:用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎
细胞
,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。6、加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。
请教一个关于从
细胞
中
提取
总
RNA
的问题
答:
通过它来间接判断你的目标DNA或者
RNA
的
提取
情况。共
沉淀
剂有很多,只要这些物质不跟你的目标发生反应,不干扰你的目标,跟你的目标有相同的沉降系数都可以作为共沉淀剂 常用的比如glycogen,酵母RNA 或者 tRNA,henry DNA,鲑鱼精子DNA,线性丙烯酰胺等等 carrier DNA也是RNA,只不过是不会干扰你的目标RNA...
如何防止
提取
过程中
RNA
的降解
答:
通过变性剂破碎
细胞
或者组织,然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA,再经过
沉淀
,洗涤,晾干,最后溶解。但是由于RNA酶无处不在,随时可能将RNA降解,所以实验中有很多地方需要注意,稍有疏忽就会前功尽弃。0T3z(F&_,D6c%^"h6YA6_
RNA提取
的一般步骤-O:Y+x$p#s8U4M9S所有RNA的提取过程中都有五个关键点,即:样品细胞或...
为什么
提取RNA
时出现一坨白色
沉淀
答:
也就是说,培养
细胞
由于很容易迅速与裂解液充分接触,所以其
RNA
不容易被降解;反过来讲,组织中的RNA之所以容易被降解,是因为组织中的细胞不容易迅速与裂解液充分接触所致。因此,假定有一种法,在抑制RNA活性的同时能使组织变成单个细胞,降解问题也就可以彻底解决了。液氮碾磨就是最有效的这样一种法。但...
动物
RNA
的
提取
答:
1. 从少量样品(1-10mg组织或102-104
细胞
)中
提取RNA
时可加入少许糖原以促进
RNA沉淀
。例如加800ml TRIzol匀浆样品,
沉淀RNA
前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成,也不影响PCR反应。2. 匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一...
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