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外源基因的表达
怎样才能在特定组织中
表达外源基因
答:
在目的基因的两端分别加上只在该组织中
表达的基因的
启动子等调控组件。例如人们就是用这种方法让药物蛋白基因在乳腺细胞中表达的。
外源基因的表达
与检测方法及步骤? 关键技术有哪些?
答:
用PCR-Southem方法进行外源基因的整合检测、ELISA法进行
外源基因的表达
检测,对4代转基因小鼠进行了跟踪测定,结果表明:的代转基因小鼠的整合率为56%,原代雌鼠乳汁中转基因产物的表达率为100%;传代跟踪基因的整合率不符合“单一位点随机整合”的假说,家系分析推测外源基因在受精卵 ...
如何提高转基因动物中
外源基因的
整合率与
表达
率
答:
分娩,再把注射过DNA的胚胎移植到动物体内。先在体外培养的体细胞中进行基因导入。然后,再把其移植到假孕母体。然后,待其妊娠,注射的外源基因与胚胎基因组融合。用这种方法生产的动物约有十分之一是整合
外源基因的
转基因动物。在显微镜下,使其具有携带外源基因的能力:(1)核显微注射法核显微注射法是...
在大肠杆菌中
表达外源基因
需要注意什么
答:
原核载体
表达基因
通用:启动子,rbs,终止子缺一不可 rbs离表达框的距离一定要在8个碱基左右 插入基因必须有正确的阅读框,不能移位 大肠杆菌中表达:需考虑大肠杆菌密码子偏好问题。需点突变更改
外源基因的
稀有密码子。
插入的
外源基因
对宿主的
基因表达
有什么影响
答:
插入的
外源基因
一定是位于宿主细胞基因的启动子和终止子之间,也就是说一般会破坏插入
基因的表达
,所以外源基因插入的基因一般是对细胞代谢关系不大的细胞质基因(比如原核细胞中的质粒)。基因工程中的外源基因(目的基因)就是取代原来基因的位置进行表达。
如何利用大肠杆菌做寄主进行DNA克隆并使
外源基因
得到
表达
答:
将目的目的基因克隆在载体质粒上,然后将载体质粒转入大肠杆菌中,选择成功转入质粒的大肠杆菌进行培养,就可诱导目的
基因的表达
了
外源基因
在真核细胞内
表达
的意义?
答:
例如,抗虫棉,外源基因是杀虫的。例如,转基因奶牛,
外源基因表达
产生胰岛素,治疗糖尿病。
微生物
表达外源基因
需要注意什么
答:
表达的外源基因
是什么,对宿主细胞是不是有害,会不会形成包涵体,产物是存在于细胞内还是分泌到细胞外,总之要注意选择好合适的宿主(涉及到真核生物的蛋白,你要考虑翻译后修饰问题,这个时候再用大肠杆菌就不合适了),产物合适的分离方法和菌的最佳培养条件等。
重组菌当中的
外源基因
是否
表达
可以通过几个层面进行分析
答:
外源基因的表达
与检测 9 超声处理5分钟,每30秒间隔50秒,12000rpm离心10分钟,取上清作为蛋白样品。10 渠5ul测定蛋白浓度。11 取50ug蛋白上样,加入5ul上样缓冲液,沸水浴5分钟,瞬时离心后上样。12 170V恒压电泳至溴酚蓝至凝胶前沿。13 染色1小时 14 脱色至条带清晰,背景明亮为止。结果: ...
为什么
外源基因
在酵母中用整合方式
表达
答:
一楼说的对,就是简略了点。采用整合方式
表达
就是
外源基因
随染色体复制进行整合型表达,稳定性高,不会随酵母的增殖而丢失;反之,如果是酵母染色体之外的质粒,就很可能会随着酵母的复制而逐渐丢失了。
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