66问答网
所有问题
当前搜索:
pcr恒温扩增法
pcr扩增
的原理和步骤
答:
实验
方法
原理: ①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经
PCR扩增
形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备; ②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合; ...
PCR
与LAMP的关系PCR和LAMP都属于基因
扩增
技术吗
答:
LAMP,环介导等温
扩增法
,英文名称为loop-mediatedisothermal amplification,是一种新型的核酸
扩增方法
,其特点是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物,在链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)的作用下,60--65℃
恒温扩增
,15-60分钟左右即可实现10^9~10^10倍的核酸扩增
PCR
技术的基本原理类似于DNA的天然复制...
PCR扩增
过程
答:
①首先是将含有待
扩增
DNA样品的反应混合物放置在高温(>91℃)环境下加热1分钟,使双链DNA变性,形成单链模板DNA;②降低反应温度(约50℃),致冷1分钟,使寡核苷酸引物与两条单链模板DNA发生退火作用并结合在靶DNA区段两端的互补序列位置上;③将反应混合物的温度上升到72左右保温1-数分钟,在DNA聚合酶...
PCR扩增
温度怎样设置?
答:
1、退火温度低于引物Tm值5 ℃左右,一般在45~55℃。退火温度需要从多方面去决定,一般根据引物的Tm值(Tm值=4(G+C) +2(A+T))为参考,根据
扩增
的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对
PCR
的特异性有较大影响。2、延伸时间:1min/kb(10kb内)。引物延伸一般在72...
pcr扩增
的原理和步骤
答:
实验
方法
原理 ①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经
PCR扩增
形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的...
pcr扩增
实验步骤
答:
free water、10×PCR Buffer、dNTP Mix、引物,最后加DAN聚合酶的顺序进行加样,注意模板需在模板区加入。2、添加模板 在模板区,加入适量的模板,加入后盖紧反应管。模板过多会对
PCR扩增
产生阻碍,模板过少、模板不纯、降解或有抑制物,会影响PCR扩增效率。通常用OD260/280来检测DNA纯度。
如何理解
pcr扩增
的原理和过程
答:
pcr扩增
步骤 标准的
PCR
过程分为三步:DNA变性:(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA 退火:(60℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。延伸:(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP为原料,从引物的3′端开始以从5′...
PCR
反应温度怎么设置?
答:
在
pcr
反应过程中,要使用三个不同的温度变化,有变性,退火,
扩增
三个不同的反应阶段,而这三个反应需要的最适温度不同。具体设置如下:1、变性反应温度的设置 当温度控制在90 °C以上时DNA会发生变性,双链DNA解链成单链。2、退火反应温度的设置 当温度下降到50 °C的时候,DNA复性,两种引物通过...
PCR
实验
方法
步骤
答:
调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置
PCR
仪上,执行
扩增
。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,最后在72℃ 保温7min。请点击输入图片描述 3/4 结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。请点击输入图片描述 4...
我想问做
PCR扩增
应该注意的事项?
答:
(10)
扩增
产物的鉴定 DEPC处理
方法
如下: 1. DEPC处理 (1)DEPC水:100ml超纯水加入0.2ml DEPC,充分混匀,高压灭菌。 (2)Tip头(枪头)、EP管等在提RNA过程中及做RT时接触RNA的器材(包括1ml、200μl、20μl Tip头;EP管和
PCR
反应管等):用0.1%的DEPC水(1000 ml超纯水加入1ml DEPC)37℃浸泡过夜,高压灭菌...
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
涓嬩竴椤
灏鹃〉
其他人还搜
恒温扩增与传统pcr
数字pcr恒温扩增技术
RNA恒温扩增法是检查什么
酶切探针恒温扩增法
恒温pcr与荧光定量pcr的区别
环介导等温扩增技术
RAA等温扩增
核酸恒温扩增法是用来干嘛的
恒温扩增技术的基本原理