PCR实验方法步骤

Question

如题所述

Answer 1

PCR在分子克隆和DNA分析中有多种用途，下面小编就向大家介绍PCR实验方法步骤：

方法

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在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。      

10×PCR buffer                    

5 μl     dNTP mix （2mM）              

4 μl     引物1（10pM）                  

2 μl     引物2（10pM）                  

2 μl     Taq酶 （2U/μl）                

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）   

1 μl      加ddH2O至 50 μl   

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。




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调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，最后在72℃ 保温7min。




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结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。



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PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。


END



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