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荧光素酶报告基因步骤
求助怎么做
荧光素酶报告基因
实验
答:
(1) 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。(2)设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段,将此片段插入到
荧光素酶报告基因
质粒(pGL3-basic)中。(3)筛选阳性克隆,测序。扩增克隆并提纯质粒备用。(4) 扩增转录因子质粒,提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照...
双
荧光素酶报告基因
实验原理?
答:
以下是双
荧光素酶报告基因
实验的基本原理
步骤
:1、构建负责表达荧光素酶的载体:在实验中,通常将感兴趣的基因调控区域与荧光素酶基因关联起来,构建成双荧光素酶报告基因的表达载体。这个基因构建过程通常通过分子克隆技术来完成。2、转染细胞:将上述构建好的表达载体引入目标细胞中。转染方法可以选择适合的...
荧光素酶报告基因
检测
答:
1、重组质粒制备: 制备含有待检测基因Luc/Rluc的重组质粒
;2、共转染: 将带有Luc/Rluc标记的报告基因和目的基因进行共转染,通常24-48h;(选择转染效率较高的HEK-293T细胞或原代细胞等)3、细胞处理: 双荧光素酶检测试剂盒依照protocol操作;4、荧光检测: 使用酶标仪或具有类似检测功能的设备进行荧光...
荧光素酶报告基因
技术流程
答:
荧光素酶报告基因技术的流程如下:首先,
通过生物信息学手段,对启动子区域进行深入分析,预测潜在的转录因子结合位点,以确定合适的基因片段
。接着,利用PCR技术从基因组DNA中精确克隆所需的启动子片段,然后将其整合到荧光素酶报告基因质粒(pGL3-basic)中,形成重组质粒。完成重组后,对克隆进行筛选并进行...
怎么使用多功能酶标仪检测双
荧光素酶报告基因
答:
以Promega公司双
荧光素酶
检测试剂盒为例:1. 试剂准备 按照说明书配制PLB细胞裂解液、LAR II检测液、Stop&Glo检测液。2.仪器准备 准备单管或微孔板发光检测仪 3. 样品准备 按照说明书使用PLB细胞裂解液裂解细胞,取20ul细胞裂解液 4. 检测过程 a) 在1.5ml离心管中加入20ul细胞裂解液,然后加入100...
荧光素酶报告基因
实验
答:
图3
荧光素酶报告
实验图解 由于荧光素酶超级灵敏的能力和宽广的动力学范围,荧光素酶系统得到了广泛的使用。通常荧光素酶的实验会将待检测的调控元件(启动子)安排在荧光素酶
基因
的上游,构建成载体,然后将构建完成的载体导入到合适的动物细胞中,通过检测荧光素酶的活性来判断调控元件的活性。在荧光素...
双
荧光素酶
应用实例(一)
答:
1、验证microRNA同mRNA靶向互作。将待测基因的3’UTR序列插入
报告基因
载体,再共转入该microRNA,检测
荧光素酶
活性下降,则提示为其靶序列。2、验证microRNA同lncRNA靶向互作。将待测lncRNA序列插入报告基因载体的3’UTR区域,检测荧光素酶活性。3、启动子结构分析。将启动子区域(约2k左右)进行...
荧光素酶报告基因
的原理与应用
答:
\n\n要使用
荧光素酶报告基因
,首先需通过生物信息学手段预测启动子的转录因子结合位点,然后克隆靶启动子片段并整合到荧光素酶质粒中。接下来,通过转染细胞、提取蛋白并检测酶活性,每一步都严谨而关键。具体
步骤
如下:\n\n1. 筛选转录因子结合位点,设计引物进行PCR克隆。\n2. 将克隆片段插入pGL3-...
双
荧光素酶
报道系统详解
答:
在测量过程中,当加入荧光素酶检测试剂II (LARII)时产生萤火虫荧光信号,这样先测量萤火虫
荧光素酶报告基因
。定量萤火虫荧光强度之后,再在同一样品中加入Stop & Glo® 试剂,将上述反应淬灭,并同时启动海肾荧光素酶反应,同时进行第二次测量。三、操作程序与结果判定 A.检测前相关试剂配制 1....
荧光素酶报告基因
的应用原理
答:
(1)构建一个将靶启动子的特定片段插入到
荧光素酶
表达序列前方的
报告基因
质粒,如pGL3-basic等。(2) 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子,则荧光素酶基因就会表达,荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。(3) 加入特定...
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