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荧光素酶报告基因数值
荧光素酶报告基因
检测
答:
1、pRL-TK这个载体是由Promega开发的,pRL-TK是海肾
荧光素酶报告
载体,含有SV40增强子,质粒图谱如下所示:2、pGL3-Basic是萤火虫
荧光报告
载体,图谱如下图所示:从这两个图谱中可以发现,ppGL3-Basic这个载体主要是用于评估miRNA与靶
基因
3’UTR的结合,靶基因的3’UTR放在荧光素酶的后面,这个荧光素酶...
荧光素酶报告基因
答:
荧光素酶浓度在10—16mol/L(10pS/L)到10-8mol/L(1mg/L)范围内
,荧光信号强度与酶浓度成正比。在理想条件下,可检测到l0-20mol/L的荧光素酶。
双
荧光素酶报告基因
答:
miRNA主要通过作用于靶基因的3’ UTR起作用,因此可以将目的基因的3’ UTR区域构建到载体
报告基因
萤火虫
荧光素酶
的后面,通过与miRNA共转染后,检测报告基因表达的变化来反映miRNA对目的基因的抑制作用。
求助怎么做
荧光素酶报告基因
实验
答:
(5) 培养293(或其它目的细胞),并接种于24孔板中,生长10-24小时(80%汇合度)。(6) 将
报告基因
质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。(7)提取蛋白并用于
荧光素酶
检测。(8) 加入底物,测定荧光素酶的活性。(9) 计算相对荧光强度,并与空载对照比较。
双
荧光素酶报告基因
实验原理
答:
接着将荧光素基质添加到细胞中,通过检测产生的光信号来定量测定报告基因的表达水平。该技术具有高灵敏度、精准度高、重复性好、操作简便等优点,
荧光素酶报告基因
检测是以荧光素,可以用于研究基因表达调控机制、筛选药物和检测细胞信号通路等。但也存在一些局限性,如需要对目标细胞进行转染处理、被测基因...
luciferase实验luciferase实验原理
答:
5、(2) 将要检测的转录因子表达质粒与
报告基因
质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。6、如果此转录因子能够激活靶启动子,则
荧光素酶
基因就会表达,荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。7、(3) 加入特定的荧光素酶底物,荧光素酶与底物反应,产生荧光,通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶...
【实用干货】双
荧光素酶报告基因
检测
答:
特别是在双报告基因检测中,一个荧光素酶(如荧火虫荧光素酶)作为实验基因的表达指标,另一个(如海肾荧光素酶,如pRL-TK载体中的)作为内对照,以消除实验条件变化带来的误差。这种方法旨在通过比较两个基因的表达变化,精确评估调控因素对基因表达的影响,如miRNA对靶基因的调控。双
荧光素酶报告基因
...
双
荧光素酶报告基因
的应用,常见载体及案例简介
答:
通过结合Firefly
荧光素酶
(F-Luc)和海肾荧光素酶(R-Luc),构建的
报告
系统能够检测到微小的
基因
调控变化。F-Luc依赖荧光素和氧气在ATP作用下产生560nm左右的生物荧光,其上游启动子区插入不同的序列会改变荧光输出。R-Luc则作为内参,通过腔肠素底物催化生成465nm的荧光,确保数据准确性。这种技术的应用...
技术分享第十七期 | 双
荧光素酶报告基因
检测
答:
萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶不仅在底物需求上有所不同:前者需荧光素、氧气、ATP和镁离子,后者仅需腔肠素和氧气,这使得它们的发光机制各异。萤火虫酶的黄绿色光波(550-570nm)与海肾酶的蓝色光波(480nm)相得益彰,为双报告实验赋予了独特的优势。双报告基因的科学力量</ 双
荧光素酶报告基因
...
双
荧光素酶报告基因
实验原理?
答:
4、
荧光素酶报告基因
的内参控制:实验中通常会同时转染一种稳定表达的荧光素酶基因(如Renilla荧光素酶基因),用作内参。这是为了校正在不同样本中可能存在的转染效率等差异。5、荧光检测仪读数:使用荧光检测仪对加入细胞含有荧光素底物的溶液进行读数。由于两种荧光素酶产生荧光的波长不同,可以使用不同...
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