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煮沸法提取细菌dna步骤
肠球菌
煮沸法提取DNA
的具体操作是什么?
答:
沸
水浴半小时,然后马上放到-20℃冷冻,化冻后5000rpm离心1min取上清PCR
请教:
细菌DNA
的
提取
答:
二、CTAB/NaCl 法 CTAB/NaCl
法提取的DNA
纯度较高,蛋白杂质较少,保存时间长,编者更喜欢把终浓度为20μg/ml RnaseA加在第5步温育的时候,这样最后没有RnaseA污染。每一步操作细致一些,得到的DNA可用于Southern blot。注意:长时间保存DNA可放于-20℃,但要尽量减少反复冻融,否则影响DNA质量。三...
...灭活之前是可以扩出来的,模板是将菌液用
煮沸法
制备的
答:
回答:甲醛可以固定蛋白质。灭活时,使得原来
DNA
上结合的蛋白固定无法脱离,肯定会影响引物的结合。有一种方法简称ChIP,就是用甲醛固定的办法研究DNA结合蛋白的,引物设计上需要相当的技巧。如果灭活是为了消毒,建议菌液
煮沸
即可。
煮沸法提取
病毒
dna
的原理
答:
在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M,加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出
,然后分别用66%到80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得dna样品,此法提取的dna中蛋白质含量较高,故一般不用,为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入sds。
煮沸法提取
革兰氏阳性
菌的dna
答:
最好别那么干
煮沸
不是好主意 大致
提取
有生物活性
的DNA
的方法是 G+的话 可以用溶菌酶在低渗EDTA-PBS环境下 裂解菌体 然后氯仿等有机溶剂变性掉杂质蛋白 再用氯化钠沉淀 乙醇淋洗 多次精制之后 可以获得能用于PCR的DNA
质粒的分离操作
答:
大量
提取
的质粒
DNA
一般需进一步纯化,常用柱层析法和氯化绝梯度离心法。(一)、碱法1、取培养至对数生长后期的含pBS质粒的
细菌
培养液250ml,4℃下5000g离心15分钟,弃上清,将离心管倒置使上清液全部流尽。2、将细菌沉淀重新悬浮于50ml用冰预冷的STE中(此步可省略)。3、同
步骤
1方法离心以收集细菌细胞。4、将细菌...
TG1大肠杆菌能提出质粒,求解~
答:
7、用无菌牙签从eppendorf管中去除
细菌
碎片。8、取20ml进行电泳检查。[注意] 1. 对大肠杆菌可从固体培养基上挑取单个菌落直接进行
煮沸法提取
质粒
DNA
.2. 煮沸法中添加溶菌酶有一定限度,浓度高时,细菌裂解效果反而不好。有时不同溶菌酶也能溶菌。3. 提取的质粒DNA中会含有RNA,但RNA并不干扰进一步实验...
为什么沸水浴之后质粒可以复性
DNA
不能
答:
煮沸法
是将
细菌
悬浮于含有Triton X-100和能消化细胞壁的溶菌酶的缓冲液中,然后加热到100℃使其裂解。加热除了破坏细菌外壁,还有助于解开
DNA
链的碱基配对,并使蛋白质和染色体DNA变性。但是。闭环质粒DNA链彼此不会分离,这是因为它们的磷酸二酯骨架具有互相缠绕的拓扑结构。当温度下降后,闭环DNA的碱基...
哪些化学因素可引起
细菌
细胞中的质粒消除
答:
以上两种制备方法的实验
过程
中,然后在高温条件下。在实际操作中可以根据宿主菌株的类型,但RNA一般并不干扰进一步实验、鉴定片段的插入方向,而复性的质粒
DNA
恢复原来构型、碱基组成和结构等特点以及质粒DNA的用途选择不同的方法。本实验介绍最常用的碱裂解法和
煮沸法提取
质粒DNA,保持可溶性状态;(2)具有多...
提取
质粒的主要
步骤
答:
质粒抽提方法即去除 RNA,将质粒与
细菌
基因组
DNA
分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。
提取
质粒DNA的方法有很多种,从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取,从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取,从具体操作方法分可以分为碱裂解法、
煮沸法
、牙签法等,各种不同的...
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