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能不能帮我设计一个生物化学实验???
我是一个大学生,最近要自己设计一个生物化学实验,简单一点的就行。实验室仪器有限。我们已经做过蛋白质含量的测定,糖含量的测定,DNA和RNA的提取分离等等!!别太复杂啦!!
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推荐答案 2008-11-06
实验二 氨基酸的分离鉴定――纸层析法
一、目的
通过氨基酸的分离,学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
层析溶剂由有机溶剂和水组成。
物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值(比移)来表示的:
Rf = 原点到层析中心的距离 / 原点到容剂前沿的距离
在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。
三、器材
1、层析缸 2、毛细管 3、喷雾器 4、培养皿 5、层析滤纸(新华一号)
四、试剂
1、扩展剂 650mL
是4份水饱和的正丁醇和1份醋酸的混合物。将20 mL正丁醇和5 mL冰醋酸放人分液漏斗中,与15mL水混合,充分振荡,静置后分层,放出下层水层。取漏斗内的扩展剂约5mL置于小烧杯中做平衡溶剂,其余的倒人培养皿中备用。
2、氨基酸溶液 0.5%的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液(各组份浓度均为0.5%)。各5mL
3、显色剂 50~lOOmL0.1%水合茚三酮正丁醇溶液。
五、操作
1、将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。
2、取层析滤纸(长22 cm、宽14 cm)一张。在纸的一端距边缘2~3 cm处用铅笔划一条直线,在此直线上每间隔2cm作一记号。
3、点样用毛细管将各氨基酸样品分别点在这6个位置上,干后再点一次。每点在纸上扩散的直径,最大不超过3 mm。
4、扩展 用线将滤纸缝成筒状,纸的两边不能接触。将盛有约20 mL扩展剂的培养皿迅速置于密闭的层析缸中,并将滤纸直立于培养皿中(点样的一端在下,扩展剂的液面需低于点样线1 cm)。待溶剂上升15―20 cm时即取出滤纸,铅笔描出溶剂前沿界线,自然干燥或用吹风机热风吹干。
5、显色 用喷雾器均匀喷上0。1%茚三酮正丁醇溶液,然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。
6、计算各种氨基酸的Rf值。
思 考 题
1、何谓纸层析法?
2、何谓及f值?影响只f值的主要因素是什么?
3、怎样制备扩展剂?
4、层析缸中平衡溶剂的作用是什么?
温馨提示:答案为网友推荐,仅供参考
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其他回答
第1个回答 2008-11-08
实验就要自己设计啊,要别人帮你设计还有什么意思?别人只是能给你提供下题材和方向.你说了你做过蛋白质含量的测定,蛋白质含量有很多测定方法,你是否都用过呢?比如现在奶粉问题就因为先前他们用凯式定氮,所以查不出三聚氰胺,用双缩尿和烤马式亮蓝等方法却能清楚的检测出,你可以比较他们的异同并指出起原因啊.
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